【摘 要】
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目的 构建2-型登革病毒(dengue virus-2,DENV-2)非结构蛋白NS3与亲和标签融合蛋白的表达质粒,串联亲和纯化法(tandem affinity purification,TAP)获得与NS3相互作用的蛋
【出 处】
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第六届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛
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目的 构建2-型登革病毒(dengue virus-2,DENV-2)非结构蛋白NS3与亲和标签融合蛋白的表达质粒,串联亲和纯化法(tandem affinity purification,TAP)获得与NS3相互作用的蛋白。方法 根据DENV-2基因序列,设计引物并交由公司化学合成；以DENV-2 cDNA为模板,PCR扩增出NS3基因,经酶切后克隆至含有串联亲和标签(FLAG-StrepⅡ)的哺乳真核表达载体pCI-SFTAP,获得重组表达质粒pCI-NS3-SFTAP；将上述重组质粒通过转染试剂Lipofectamine 2000瞬时转染进入293T细胞,Western blot验证NS3融合蛋白的表达；通过串联亲和纯化的方法分离纯化与NS3相互作用的蛋白。结果 成功构建了NS3融合蛋白表达载体,利用串联亲和纯化系统分离得到了与NS3蛋白相互作用的宿主蛋白。结论 串联亲和纯化法是一种有效的分离与NS3相互作用的细胞蛋白的方法,该研究为进一步鉴定与研究登革病毒的复制机理奠定了实验基础。
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