【摘 要】
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刺激隐核虫是海水鱼类的寄生纤毛虫,能引起白点病,严重危害海水鱼类养殖业的发展,造成了巨大的经济损失.Profilin是一种肌动蛋白结合蛋白,是引起单体肌动蛋白聚合的主要
【机 构】
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福建师范大学生命科学学院,福建省发育与神经生物学重点实验室,福建福州
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刺激隐核虫是海水鱼类的寄生纤毛虫,能引起白点病,严重危害海水鱼类养殖业的发展,造成了巨大的经济损失.Profilin是一种肌动蛋白结合蛋白,是引起单体肌动蛋白聚合的主要因子,在调节肌动蛋白细胞骨架的动态变化中起着重要的作用.本实验从刺激隐核虫滋养体期cDNA文库中克隆了Profilin的基因同源物,其全长cDNA为592 bp,含一个471 bp的开放阅读框,编码预测分子量为17.3 kDa的多肽链.该多肽链与嗜热四膜虫Tetrahymena的profilin的同源性最高,相似度达46％.将该cDNA编码区中的非通用密码子TAA和TAG经PCR定点诱变成CAA和CAG后,克隆到原核表达载体pGEX-4T-1上,并在大肠杆菌(Escherichia coli)中诱导表达成与谷胱甘肽巯基转移酶融合的蛋白rGST-CiProfilin.rGST-CiProfilin经谷胱甘肽-4B琼脂糖凝胶纯化,并用凝血酶(Thrombin)切除了GST后,用于免疫小鼠制备抗血清,用于蛋白印迹试验分析了刺激隐核虫不同生长阶段该蛋白的差异性表达.该实验为病原生物—刺激隐核虫的细胞骨架的研究打下了一定的基础.
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On May 16,