【摘 要】
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本研究用酿酒酵母作为载体,根据EtMIC1不同TSP结构域将其分成3段,提取柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子总RNA,以随机引物反转录合成cDNA第一条链,PCR扩增EtMICl全长,再以EtMIC1全
【出 处】
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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会
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本研究用酿酒酵母作为载体,根据EtMIC1不同TSP结构域将其分成3段,提取柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子总RNA,以随机引物反转录合成cDNA第一条链,PCR扩增EtMICl全长,再以EtMIC1全长为模板分别扩增EtMIC1-Ⅰ;EtMIC1-Ⅱ及EtMIC1-Ⅲ片段,分别构建pCTCON2-EtMIC1-(Ⅰ-Ⅲ)重组质粒;将阳性质粒转染到酿酒酵母(S.Cerevisiae)EBY 100,菌落PCR筛选阳性转化子,经2%半乳糖诱导使EtMIC1各分段蛋白在EBY100细胞表面表达,采用间接免疫荧光法,用荧光显微镜检测EtMIC1各分段蛋白在EBY100细胞表面展示情况.实验结果表明成功构建的pCTCON2-EtMIC1(Ⅰ-Ⅲ)重组质粒,转化酵母细胞后,在EBY100细胞表面展示具有生物活性的目的蛋白,为后续制备口服活载体疫苗免疫雏鸡来深入研究EtMICl不同区域蛋白免疫原性并比较其差异性筛选候选疫苗靶抗原奠定基础.
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