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人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells, hUC-MSCs)因取材方便、易扩增、无伦理学限制、无病毒感染的风险,近年来受到研究者的高度关注,并开始将其应用于临床研究。研究表明,hUC-MSCs具有潜在的组织器官修复的能力,且具有肿瘤趋向性,能够直接抑制某些肿瘤在体内和体外的增殖能力。本研究分离鉴定了hUC-MSCs,并在其对肺癌细胞的恶性表型影响及作用机制方面进行了研究。本文首先通过组织块法和酶消化法从人脐带组织中分离得到原代hUC-MSCs,显微镜下观察,细胞呈长梭状,放射状或漩涡状排列。组织块法获得的细胞经传代培养后,利用流式细胞术检测细胞表面标志,表明所获得的细胞高表达CD29、CD44、CD73、D90和CD105,不表达CD34、D45和HLA-DR;成脂诱导培养15天后经油红-O染色有红色脂滴出现,RT-PCR可检测到PPAR-y表达；成骨诱导培养21天后经ALP染色细胞呈阳性,茜素红染色有骨结节出现,RT-PCR可检测到Osteocalcin表达,表明hUC-MSCs具有向成脂和成骨分化的潜能。以上研究证实,本研究获得的hUC-MSCs具有典型的间充质干细胞的基本特性,且经多次传代后仍保持MSCs的基本特征。为了探究hUC-MSCs对人肺癌细胞系A549和H460的恶性表型的影响,收集hUC-MSCs培养液上清,制成hUC-MSCs条件培养基(hUC-MSCs-CM),作用于人肺癌细胞株A549和H460。在分别作用24h、48h、72h后,检测两种肺癌细胞的增殖能力和锚定非依赖型生长能力；用Transwell、室实验测定这两种肺癌细胞体外迁移和侵袭能力,并用Real-time PCR检测肺癌细胞中的促凋亡基因、凋亡抑制基因及抑癌基因的表达。研究结果表明：hUC-MSCs-CM培养24h、48h、72h后,A549细胞的增殖抑制率分别为62.1%、57%、43.7%,H460细胞的增殖抑制率分别为26.4%、33.4%、59.5%；A549的锚定非依赖型生长抑制率分别为1.92%、37.03%、56.41%,H460的锚定非依赖型生长抑制率分别为48.12%、58.31%、83.73%；A549的迁移抑制率分别为64.17%、45.3%、50.78%,H460的迁移抑制率分别为66.92%、61.90%、56.42%；A549的侵袭抑制率分别为55.63%、77.06%、59.46%,H460的侵袭抑制率分别为49.29%、65.01%、56.34%。进一步分析表明,与无血清DMEM/F12培养对照组相比,hUC-MSCs-CM培养A549和H460细胞24h、48h、72h后,促凋亡基因Caspase3和Caspase9和抑癌基因RUN3和CDHl的mRNA表达量均有不同程度的升高；凋亡抑制基因Survivin和XLAP的mRNA表达量均有不同程度的降低。综上所述,本研究分离培养的人脐带间充质干细胞具有间充质干细胞的基本特性并具有多向分化潜能；hUC-MSCs条件培养基通过影响抑癌基因和凋亡相关基因的表达,抑制了人肺癌A549、H460细胞系的增殖、锚定非依赖型生长、迁移和侵袭能力。