目的探讨七氟醚麻醉对老龄大鼠血脑屏障的影响及Wnt/β-catenin-Annexin A1通路在其中的作用。内容制作老龄大鼠吸入七氟醚模型,从在体水平研究七氟醚对血脑屏障组成部分以及Annexin A1蛋白表达水平的影响。采用7日龄幼鼠脑组织微血管内皮细胞培养技术,从离体水平证明七氟醚对于Wnt/β-catenin通路活性的影响以及后者对Annexin A1表达的调节。为麻醉药物的选择提供参考。方法该研究主要分为三部分:第一部分采取18至20月龄雄性老龄大鼠,分为对照组(C组):持续吸入含有氧浓度为30%的空气;七氟醚组(S组):持续吸入含有不同浓度七氟醚(2.4%,3.1%,3.6%)的混合气体,吸入持续时间分别为2h,4h,6h。于术后24h采用过深麻醉方法处死动物,取海马组织,分别采用伊文氏蓝染色以及免疫荧光法对纤维蛋白原fibrinigen进行染色,检测各组伊文氏蓝以及fibrinogen在海马沉积面积的变化。第二部分为在体实验。首先采取18至20月龄雄性老龄大鼠,应用免疫荧光染色法,将Annexin A1分别与神经元标记物Neu N、小胶质细胞标记物Iba-1以及血管内皮细胞标记物CD31进行双染,观察海马部位Annexin A1细胞来源。然后制作老龄大鼠吸入七氟醚模型(6h,3.6%),采用western blot方法于麻醉结束后6h、12h、24h检测老龄大鼠海马组织内紧密连接蛋白occludin、claudin-3以及claudin-5和ZO-1,黏附连接蛋白VE-cadherin,细胞骨架蛋白F-actin蛋白表达含量的改变,以及麻醉结束后采用western blot和免疫荧光染色法于6h、12h、24h检测老龄大鼠海马部位膜联蛋白Annexin A1蛋白表达含量的改变。最后将老龄大鼠随机分为3组:(1)对照组(C组):持续吸入含有氧浓度为30%的空气。(2)七氟醚组(S组):持续吸入七氟醚浓度为3.6%的混合气体6h;(3)人重组Annexin A1+七氟醚组(AS组):麻醉前1小时尾静脉注射人重组膜联蛋白Annexin A1,后持续吸入含有七氟醚浓度为3.6%的混合气体,持续6h。采用western blot方法检测麻醉结束后24h时间点老龄大鼠海马组织内紧密连接蛋白occludin、claudin-3以及claudin-5和ZO-1,黏附连接蛋白VE-cadherin,细胞骨架蛋白F-actin蛋白表达含量的改变;采用免疫荧光方法检测麻醉后24h时间点老龄大鼠海马纤维蛋白原沉积;采用Y迷宫和条件恐惧法检测麻醉后1d和3d老龄大鼠认知功能。第三部分为离体实验,分为两部分。首先采用出生后7d的雄性Wistar大鼠,提取脑组织微血管内皮细胞进行体外培养,重构血脑屏障的体外模型。观察麻醉前以及采用3.6%七氟醚处理6h后的第6h、12h以及24h内皮细胞总蛋白与核蛋白水平的β-catenin以及总蛋白水平的GSK-3β。然后分别在有/无七氟醚麻醉处理的情况下给予该种培养细胞Wnt/β-catenin的激动剂wnt-3a以及抑制剂DKK1,并采用western blot以及免疫荧光方法检测处理后Annexin A1表达水平。结果与对照组相比,吸入3.6%浓度七氟醚6h引起麻醉后24h老龄大鼠海马伊文氏蓝以及纤维蛋白原沉积面积均显著升高。老龄大鼠海马组织内的Annexin A1与血管内皮标记物CD31高度重合。与麻醉前对照组相比,老龄大鼠海马血脑屏障occludin,claudin-3,VE-cadherin以及F-actin于麻醉后24h蛋白表达降低;与麻醉前相比,麻醉后24h老龄大鼠海马Annexin A1表达显著降低。与S组动物相比,AS组occludin,claudin-3,VE-cadherin以及F-actin于24h后显著增加,海马纤维蛋白原沉积阳性面积降低。与C组相比,S组麻醉后1d、3d穿梭次数减少,在新异臂停留时间减少,场景相关僵直百分比下降,条件诱导僵直百分比减少;与S组相比相比,AS组麻醉后1d、3d穿梭次数增多,在新异臂停留时间延长,场景相关僵直百分比升高,条件诱导僵直百分比升高。离体实验中与未经七氟醚处理组相比,3.6%七氟醚处理6h麻醉结束后第24h微血管内皮细胞内总蛋白与核蛋白水平的β-catenin显著下降,总蛋白水平的GSK-3β蛋白表达上升。与对照组相比,wnt-3a/DKK1处理显著提高/降低血管内皮细胞Annexin A1表达。结论七氟醚麻醉通过抑制Wnt/β-catenin通路活性下调血管内皮细胞内Annexin A1的表达,从而破坏血脑屏障完整性,参与造成老龄大鼠认知功能损伤。