论文部分内容阅读
研究目的1、研究胰腺神经内分泌肿瘤的肿瘤组织及瘤旁组织的lncRNA和mRNA表达谱差异,生物信息学分析差异表达可能参与的功能机制;2、研究其中潜在的关键lncRNA在胰腺神经内分泌肿瘤组织样本中的表达情况;3、研究潜在的重要lncRNA在人源胰腺神经内分泌细胞Bon1中的作用。研究方法利用高通量芯片技术分析5对胰腺神经内分泌肿瘤的肿瘤组织与其对应的瘤旁组织之间lncRNA及mRNA的表达谱差异,进而依托生物信息学分析,预测这些存在差异的转录本(Transcrips)在肿瘤中存在哪些分子功能机制,参与了哪些生物过程及结构组成,以指导进一步的功能和机制研究。选取一些差异表达显著的、稳定的lncRNA,进行扩大样本量的定量实时PCR(Quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)验证,评估其在人组织样本中是否确实存在稳定差异。挑选在组织样本中稳定差异表达的潜在的重要lncRNA进行细胞功能研究,探寻其在人源Bon1细胞中起何种作用。结果1、获得胰腺神经内分泌肿瘤lncRNA和mRNA差异表达谱数据,并通过lncRNA子类分析,mRNA的GO分析、Pathway分析,lncRNA-mRNA共表达网络构建,预测显著差异表达的lncRNA在肿瘤细胞中参与的分子功能机制。2、芯片分析结果与定量PCR一致;lncRNA-uc001lva.4(H19)、lncRNAENST00000445606、lncRNA-uc001uzl.3、lncRNA-ENST00000393515在扩大样本量验证中差异表达均一致。3、在Bon1细胞中用shRNA敲减lncRNA-H19后,细胞增殖减慢,克隆形成能力减弱,细胞迁移能力减弱;同时,pErk1/2、pAKT308、pAKT473及pSTAT3表达均下调,提示lncRNA-H19可能通过Erk/STAT3和AKT/STA3通路影响Bon1细胞的增殖。结论胰腺神经内分泌肿瘤的肿瘤组织与瘤旁组织的lncRNA和mRNA表达谱存在很大的差异,这些差异可以作为潜在的生物标志物用于疾病诊断,并为肿瘤形成发展机制的研究提供方向。其中lncRNA-H19在人源Bon1细胞中敲减后可能通过Erk/STAT3和AKT/STAT3通路抑制细胞增殖、克隆形成、细胞周期进程及细胞迁移。