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第一部分茶多酚注射液在大鼠的血浆药代动力学目的:建立反相高效液相色谱（RP-HPLC）法同时测定大鼠血浆中茶多酚（Tea polyphenols,TP）主要抗氧活性成分表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）和表儿茶素没食子酸酯（ECG）的浓度,进而研究其药代动力学特点,为TP的新药开发及临床合理用药提供实验依据。方法:采用RP-HPLC法测定血浆样品中EGCG和ECG的浓度。固定相采用Kromasil-C18色谱柱（4.6×150 mm,5μm）,预柱为Kromasil-C18保护柱（4.6×20 mm ID,10μm）,流动相为乙腈-0.1%枸橼酸溶液,梯度洗脱,UV检测波长280nm。血浆样品200μL,加20%维生素C水溶液20μL,30μg·mL-1香草醛（内标,IS）溶液20μL,乙酸乙酯（EtoAc）500μL提取2次,合并上层有机相,N2流下37℃水浴挥干,加20%乙腈（CH3CN）水溶液100μL复溶,漩混1 min,4℃低温离心(7500 r·min-1)10 min后,取上清液60μL进样,以峰面积比内标法定量。最低定量限和标准曲线范围、日内精密度、日间精密度、准确度、萃取回收率、稳定性按药监局指导原则进行测定。雄性SD大鼠15只,随机分为三组（n=5）,即高剂量组(150 mg·kg-1)、中剂量组(100 mg·kg-1)和低剂量组(50 mg·kg-1),各动物自尾静脉注射给予TP后,于给药前和给药后不同时间点从内眦静脉收集血浆样品,应用上述方法测定血药浓度,经3P97程序处理拟合房室模型,并计算药代动力学参数。结果:EGCG和ECG的保留时间（tr）分别为11.2 min和18.3 min,IS的保留时间为16.4 min,三者之间达到基线分离,并不受空白血浆和代谢物以及TP中其他成分的干扰。EGCG和ECG标准曲线的线性范围分别为0.25～300μg·mL-1和0.1～60μg·mL-1 ,线性方程分别为Y=0.1404X + 0.005059 （r2=0.9996,n=3）和Y=0.1393X + 0.0007530 （r2=0.9997,n=3）,日内精密度RSD均小于7.97%,日间精密度RSD均小于12.99%,准确度为86.12%～112.42%。EGCG和ECG的萃取回收率分别为79.80%～84.64%和76.59%～87.27%。血浆样品-20℃保存至少一个月内稳定;室温保存至少8 h内稳定;对照品储备液-20℃保存至少两个月内稳定;血浆样品经EtoAc萃取后2～4℃保存至少24 h内稳定。EGCG和ECG的血药浓度时程符合二室模型线性动力学过程。主要药动学参数为:EGCG和ECG的t1/2β分别为111.56～144.82 min和46.27～61.18min,说明消除快速; EGCG的AUC分别为2931.60±609.26μg·mL-1·min（高剂量）,1445.52±244.94μg·mL-1·min（中剂量）和825.01±103.11μg·mL-1·min（低剂量）,ECG的AUC分别为1067.98±119.97μg·mL-1·min（高剂量）, 510.56±103.02μg·mL-1·min（中剂量）和257.21±67.69μg·mL-1·min（低剂量）;EGCG和ECG的Vd分别为4.59～5.95 L·kg-1和2.01～2.75 L·kg-1; EGCG和ECG的CL分别为0.025～0.033 L·（kg·min）-1和0.024～0.034 L·（kg·min）-1。三剂量组间AUC随剂量的增加成比例增加（p<0.05）,t1/2β,CL和Vd等参数随剂量改变无显著性差异（p>0.05）。结论:本文建立的RP-HPLC法同时测定大鼠血浆中TP主要活性成分EGCG和ECG的浓度,经方法学验证表明特异性高、精密度好、回收率高。血药浓度数据表明EGCG和ECG在本研究的剂量范围内呈线性动力学,且消除快速,分布广泛（Vd值远超过总体水体积）;与ECG相比,EGCG相对消除较慢,分布更广,但清除率基本相同。第二部分茶多酚注射液在大鼠组织中的分布目的:建立RP-HPLC法同时测定大鼠心脏、肝脏、肾脏和脑组织中TP主要活性成分EGCG和ECG的含量,研究其在组织中的分布特点,为TP的新药开发及临床合理用药提供实验依据。方法:采用RP-HPLC法测定大鼠心、肝、肾和脑组织中EGCG和ECG的含量。色谱条件与前述血浆药动学研究相同。上述组织以饱和生理盐水按1 g: 4 mL（心脏、肝脏和脑组织）和1 g: 9 mL（肾脏）的比例制成匀浆。取组织匀浆样品1 mL,加20%维生素C水溶液20μL,20μg·mL-1香草醛（IS）溶液20μL,乙酸乙酯（EtoAc）2 mL,漩混1 min,4℃低温离心(7500 r·min-1)10 min后取上层有机相,置于另一离心管中,如此共萃取2次,合并2次萃取液,N2流下37℃水浴挥干,加20%乙腈（CH3CN）水溶液200μL复溶,漩混1 min,4℃低温离心(7500 r·min-1)10 min后,取上清液60μL进样,以峰面积比内标法定量。最低定量限和标准曲线范围、日内精密度、日间精密度、萃取回收率、准确度、稳定性按药监局指导原则进行测定。健康雄性SD大鼠15只,随机分为三组（n=5）。每组动物均按100 mg·kg-1的剂量自尾静脉注射给药。三组受试大鼠分别于给药后20 min,60 min和120 min取血后处死,立即解剖采集心脏、肝脏、肾脏和脑组织,应用前述方法测定血药浓度和上述方法测定各组织中的药物含量。结果:EGCG和ECG的保留时间分别为11.2 min和18.3 min,IS的保留时间为16.4 min三者之间达到基线分离,并不受各空白组织匀浆和代谢物以及茶多酚中其他成分的干扰。各组织匀浆中EGCG和ECG标准曲线的线性范围均分别为0.25～20μg·mL-1和0.125～10μg·mL-1。心脏、肝脏、肾脏和脑组织匀浆中EGCG线性方程分别为:Y=0.7252X + 0.001502 （r2=0.9995,n=3）,Y=0.7609X + 0.06228 （r2=0.9996,n=3）,Y= 1.1210X + 0.004801（r2=0.9989, n=3）和Y=0.8366X– 0.02721 （r2=0.9999, n=3）;ECG线性方程分别为:Y=0.7170X– 0.001043 （r2=0.9988,n=3）,Y=0.6051X– 0.02370 （r2=0.9990,n=3）,Y=1.1852X– 0.05144 （r2=0.9959, n=3）和Y=0.8303X– 0.02856 （r2=0.9999,n=3）。日内和日间精密度RSD均小于15%,准确度为96.13%～104.19%。EGCG和ECG的萃取回收率分别为51.90%～75.54%和53.13%～80.65%。各组织匀浆样品-20℃保存至少一个月内稳定,室温保存至少8 h内稳定。EGCG在各组织中浓度的顺序为:肾脏(68.69μg·g-1)>血浆(19.79μg·mL-1)>肝脏(9.00μg·g-1)>心脏(7.91μg·g-1)（药后20 min）;血浆(7.52μg·mL-1)>肾脏(6.37μg·g-1)>心脏(2.33μg·g-1)>肝脏(1.10μg·g-1)（药后60 min）;血浆(3.30μg·mL-1)>肾脏(2.31μg·g-1)>心脏(0.74μg·g-1)>肝脏(0.19μg·g-1（）药后120 min)。ECG在各组织中浓度的顺序为:肾脏(42.12μg·g-1)>肝脏(10.67μg·g-1)>血浆(7.17μg·mL-1)>心脏(2.15μg·g-1)（药后20 min）;肾脏(3.05μg·g-1)>血浆(2.61μg·mL-1)>肝脏(1.36μg·g-1)>心脏(0.69μg·g-1)（药后60 min）;肾脏(1.15μg·g-1)>血浆(0.85μg·mL-1)>肝脏(0.37μg·g-1)>心脏(0.25μg·g-1)（药后120 min）。脑组织中二者均未测得。结论:本文建立的RP-HPLC法同时测定大鼠心脏、肝脏、肾脏和脑组织匀浆中TP主要活性成分EGCG和ECG的含量,经方法学验证表明特异性高,精密度好。各组织数据表明EGCG和ECG在肾脏中含量最高,肝脏和心脏次之,脑组织中含量甚微,提示EGCG和ECG不易透过血脑屏障。第三部分茶多酚注射液自大鼠尿、胆汁和粪中的排泄目的:建立RP-HPLC法同时测定大鼠尿、胆汁和粪中茶多酚（TP）主要抗氧活性成分EGCG,ECG,EGC和EC的浓度,研究其排泄特点,为TP的新药开发及临床合理用药提供实验依据。方法:采用RP-HPLC法分别测定大鼠静脉注射100 mg·kg-1的TP后,不同时间段内上述4种儿茶素类化合物在尿、胆汁和粪中的浓度/含量。尿、胆汁样品的色谱条件与前述血浆药动学研究相同,但对粪样品的色谱条件有所改进。尿样和胆汁以生理盐水适当稀释,粪样以甲醇制成10%的匀浆。各样品以10μg·mL-1香草醛（Van）溶液作为内标（IS）,经乙酸乙酯（EtoAc）液-液萃取后N2流下37℃水浴挥干,加20%乙腈（CH3CN）水溶液复溶,4℃低温离心后,取上清液60μL进样,以峰面积比内标法定量。最低定量限和标准曲线范围、日内精密度、日间精密度、准确度、萃取回收率和稳定性按药监局指导原则进行测定。健康雄性SD大鼠10只,随机分为两组（n=5）。每组动物均按100 mg·kg-1的剂量自尾静脉注射给药。一组受试大鼠自胆管插管收集空白胆汁后给药,收集不同时间段胆汁样品;另一组收集空白尿样和粪样后,给药,收集不同时间段尿样和粪样。分别应用上述方法测定胆汁浓度和尿样、粪样中的药物浓度/含量。结果:尿和胆汁色谱条件下EGCG、ECG、EGC和EC的保留时间分别为11.2 min、18.3 min、6.0 min和9.6 min,IS的保留时间为16.4 min;粪色谱条件下EGCG、ECG、EGC和EC的保留时间分别为15.25 min、21.63 min、7.72 min和13.77 min,IS的保留时间为17.69 min。相互之间达到基线分离,并不受各空白样品和代谢物以及茶多酚中其他成分的干扰。4种儿茶素类化合物的尿标准曲线的线性范围为0.50～10μg·mL-1（EGCG）,0.125～2.50μg·mL-1（ECG）,2.50～50μg·mL-1（EGC）和1.00～20μg·mL-1（EC）;胆汁标准曲线的线性范围为0.2～5μg·mL-1（EGCG）,0.2～5μg·mL-1（ECG）,0.8～20μg·mL-1（EGC）和0.4～10μg·mL-1（EC）;粪匀浆标准曲线的线性范围为1～25μg·mL-1（EGCG）,0.8～20μg·mL-1（ECG）,4～100μg·mL-1（EGC）和2～50μg·mL-1（EC）。尿、胆汁和粪匀浆中EGCG线性方程分别为:Y= 0.4505X + 0.0485 （r2=0.9972,n=3）,Y=0.4347 X + 0.03650 （r2=0.9985,n=3）和Y= 0.1475X + 0.05908 （r2=0.9997,n=3）;ECG线性方程分别为:Y=0.3839X– 0.0489（r2=0.9962,n=3）,Y=0.3512X + 0.03819 （r2=0.9994,n=3）和Y=0.2209X + 0.1219 （r2=0.9986,n=3）;EGC线性方程分别为:Y= 0.0587X + 0.1084 （r2=0.9954,n=3）,Y= 0.04993X + 0.02456 （r2=0.9990,n=3）和Y=0.01933 X + 0.07218 （r2=0.9975,n=3）;EC线性方程分别为:Y= 0.207X + 0.2283 （r2=0.9972,n=3）,Y=0.2220 X + 0.07966 （r2=0.9988,n=3）和Y=0.07538 X + 0.04321 （r2=0.9982,n=3）。日内和日间精密度RSD均小于10%,准确度为90.07%～109.17%。EGCG、ECG、EGC和EC的萃取回收率分别为65.84%～91.60%, 82.53%～99.56%,59.74%～93.00%和77.88%～101.62%。尿、胆汁和粪样品-20℃保存至少一个月内稳定,室温保存至少8 h内稳定。大鼠iv TP100 mg·kg-1后,上述4种儿茶素类化合物在尿8 h的累积排泄分数分别为1.45,0.84,7.88和10.73%;在胆汁8 h的累积排泄分数分别为0.12,1.16,0.45和0.053%;粪中EGCG和EGC的24 h累积排泄分数分别为0.07和9.99%,但ECG和EC未检测到。结论:本文建立的RP-HPLC法同时测定大鼠尿、胆汁和粪样中TP主要活性成分EGCG、ECG、EGC和EC的浓度,经方法学验证表明特异性高、精密度好、回收率高。EGCG、ECG、EGC和EC在大鼠体内仅很少一部分以原型从尿、胆汁和粪中排出。其中以尿排泄为主,其次为胆汁排泄,经粪排泄最差,提示这4种儿茶素类化合物体内代谢十分旺盛。