钩虫病是一类被忽视的重要寄生虫病,锡兰钩虫是唯一一种可在人体内发育为成虫并能引起人的腹泻、贫血等症状的动物源性钩虫。谷胱甘肽-S-转移酶（glutathione-S-transferase,GSTs）是与细胞解毒与抗氧化有关的一种多功能酶,也是蠕虫主要解毒酶之一。GSTs不仅对内源性或宿主产生的有毒产物发挥重要的解毒作用,而且还可作为抗寄生虫感染的疫苗候选分子或药物靶标。因此,本研究对锡兰钩虫谷胱甘肽-S-转移酶（Ace-GST）基因进行了克隆表达与免疫原性分析。1.锡兰钩虫Ace-GST基因的克隆与序列分析。本研究首次根据Gen Bank上锡兰钩虫GST基因序列（ANCCEY＿00737）设计特异性引物,以锡兰钩虫成虫c DNA为模板,利用RT-PCR技术成功扩增出Ace-GST基因序列。利用在线软件对该基因编码蛋白的氨基酸序列进行生物信息学分析。结果显示,Ace-GST基因全长为468 bp,编码155个氨基酸,理论分子质量为17849 Da。该蛋白为稳定的亲水性蛋白,等电点为9.49。该蛋白由5个α螺旋和4个β链折叠组成,且无跨膜结构域,无信号肽,作为线粒体靶向肽、信号肽的可能性较小。Ace-GST与Na-GST-1和Ac-GST-1氨基酸序列同源性分别为60%和52.3%。序列分析表明Ace-GST与Na-GST-1和Ac-GST-1类似,同属于ν类GSTs。2.锡兰钩虫Ace-GST基因的原核表达。将扩增产物克隆至p ET-32a载体,将测序正确的阳性克隆质粒与表达载体进行Bam H I和Eco R I双酶切,切胶回收后经T4 DNA Ligase连接,构建p ET-32a-GST重组质粒,并转化至大肠杆菌E.coli BL21（DE3）中表达。对IPTG的诱导时间进行优化,结果显示p ET-32a-GST表达条件为25℃下用1m M IPTG诱导8 h。SDS-PAGE分析重组蛋白的表达形式,结果显示rAce-GST主要存在于该重组菌裂解物的沉淀中。利用Ni柱亲和层析法纯化,获得了较纯的融合蛋白,经Western boltting鉴定为目的蛋白。3.锡兰钩虫Ace-GST重组蛋白的免疫原性分析。采用弗氏佐剂乳化的Ace-GST免疫昆明小鼠,对免疫鼠获得的抗血清进行ELISA测定,应用MTT法检测免疫鼠脾淋巴细胞的增殖情况。结果显示抗血清效价高达1:204800,IgG水平明显升高。MTT结果显示,免疫组昆明小鼠淋巴细胞刺激指数均大于1.5,且明显高于对照组（P＜0.05）,表明该重组蛋白能够促进免疫小鼠脾淋巴细胞的增殖。结果表明重组Ace-GST蛋白能够诱导昆明小鼠产生特异性免疫应答,具有良好的免疫原性。