包涵体蛋白质体外折叠复性是基因工程下游的瓶颈之一，采用传统的稀释复性方法复性包涵体蛋白质容易形成聚集体和错配体，复性后的蛋白质很难在高浓度下得到高活性回收率。本论文的目的在于利用疏水作用层析技术开发一种新的疏水作用层析辅助包涵体蛋白质复性方法，实现蛋白质在高浓度下的高活性和高回收率。 本论文分为四个部分。第一部分对复合干扰素的稀释复性条件及复性方法进行了优化，考察了聚乙二醇、甘油等渗透质以及Butyl FF、Phenyl FF、Poros ET和Poros PE等疏水层析介质作为添加剂对复合干扰素稀释复性的影响，总结出Poros ET／10％PEG混合体系为最佳，复性蛋白收率为74.6％，比活为2.61×10~8U／mg，分别高于对照组的45.4％和2.1×10~8U／mg。第二部分应用反相高效液相层析、凝胶过滤层析、离子交换层析、氧化型／还原型SDS-PAGE电泳以及质谱二硫键定位等方法对稀释复性复合干扰素的各构型体进行分析，建立了反相高效液相层析方法检测复合干扰素错配体、可溶聚集体和活性体(正确折叠体)模型。第三部分为复合干扰素的疏水作用层析复性研究。直接采用蛋白质分离纯化用的商业疏水作用层析方法不能有效地辅助蛋白质正确折叠，导致较低的活性收率和不可逆性吸附；在流动相中添加恒定浓度的渗透质聚乙二醇和应用一过性高浓度盐酸胍洗脱，一方面可以避免不可逆性吸附，另一方面可以抑制聚集体的产生，使蛋白质回收率达到70％以上，但由于形成了较高比例的错配体，使蛋白活性不高，并且复性效果明显受到上样量的限制使复性蛋白质浓度偏低。论文的一个主要贡献是根据疏水作用层析的特点，发展了一种新型的梯度增高聚乙二醇浓度和梯度降低盐酸胍浓度的双梯度疏水作用层析复性包涵体蛋白质的方法。应用现代的层析工作软件很容易完成各种浓度梯度的洗脱策略，这种梯度增高聚乙二醇浓度和梯度降低盐酸胍浓度的双梯度疏水层析辅助复性模式显示出优越性，可以获得高蛋白质浓度下的高比活性和高蛋白回收率。吸附于层析柱上的变性复合干扰素在周围溶液不断而温和变化的复性环境中逐渐被正确折叠和洗脱下来。对于各种影响因素如：盐酸胍初浓度、盐酸胍浓度梯度、聚乙二醇终浓度、聚乙二醇浓度梯度和梯度洗脱流速也进行了考察。采用优化的复性条件可以获得蛋白质收率为84％，蛋白质比活为7.9×10~8U／mg，蛋白质浓度为620ug／ml的复合干扰素，实现了包涵体变性蛋白质在高浓度下的高效复性。论文的第四部分为粒细胞集落刺激因子的疏水色谱复性研究。首先考察了甘油、吐温和聚乙二醇不同渗透质对粒细胞集落刺激因子稀释复性的影响，发现在稀释复性缓冲液中加入适当比例(15％)的甘油能够使蛋白回收率由25.4％提高到31.5％。利用双梯度疏水层析复性模式，建立了另一个包涵体蛋白质复性方法，即梯度增高甘油浓