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研究背景和目的目前恶性肿瘤的治疗仍然是一个巨大的难题,这是由于癌细胞能够迅速增殖,抵抗细胞凋亡逃避免疫系统和发生体内侵袭转移。目前肝癌居世界恶性肿瘤死亡原因的第三位,其中瘤的侵袭、转移是导致患者死亡的重要原因。以往肝细胞痫的研究主要集中以下六个方面①分子流行病学,比如：乙型、丙型等肝炎病毒的感染；②引起肝细胞癌的高危因素：酗酒、黄曲霉毒素污染等；③分子遗传学：1号染色体结构畸形等；④基因分子生物学：N-ras、p53、p21异常等；⑤表观遗传学：miR-221和miR-222等miRNA (microRNA,微小RNA)在肿瘤组织中异常表达对HCC侵袭的影响等。⑥信号途径的异常。近年随着长链非编码RNA (long non-coding RNA,IncRNA)的发现,从全新的角度去研究疾病发生发展,长链非编码RNA (IncRNA)是一类转录本长度大于200nt的RNA,缺乏编码蛋白的能力。因为许多研究发现,大部分编码基因都能找到一个或数个相应调控功能的IncRNA,其可能在转录和翻译水平调控蛋白编码基因的表达,这为肝细胞癌的研究提供了一个新的途径,然而目前关于IncRNA在肝癌的研究较少。先前前的实验研究发现,IncRNAUC001kfo在肝癌中表达明显升高,经预测分析显示UC001kfo的靶基因可能为ACTA2,而ACTA2的蛋白产物为a-平滑肌肌动蛋白(a-smooth muscle action,a-SMA),并预测可能参与肝癌的侵袭和转移的调控。a-SMA是细胞骨架的一部分,参与了细胞的分裂、运动、迁移、形态的维持、生长等多种重要细胞生理活动。目前关于a-SMA促进肝癌侵袭的的研究,仅通过免疫组化的方法,得出在早期肝癌及伴门静脉癌栓的晚期肝癌中具有差异性表达。而UC001kfo是一个新发现的基因,既往未有这研究方面的研究,本研究同时运用逆转录PCR(RT-PCR)、原位杂交、免疫组化的方法,旨在探讨α-SMA、 ACTA2及UC001kfo与肝癌侵袭、转移的关系,进一步验证α-SMA在不同时期肝癌中是否具有差异性表达,同时探讨UC001kfo与ACTA2表达的是否具有一致性及UC001kfo与肝癌侵袭转移的关系,可能为以后肝癌的治疗提供一个新的治疗依据及途径。材料与方法1.收集对照肝组织15例,肝硬化组织15例,肝癌癌组织30例,癌旁组织25例,其中10例肝癌伴有门静脉癌栓,15例对照肝组织来自于肝血管瘤、肝囊肿周边正常的肝组织,所有的肝脏组织均来自2010年1月-2011年8月在郑州大学第一附属医院进行手术切除的肝脏组织,经病理证实为肝细胞癌、肝癌癌旁组织、肝硬化组织或正正常肝脏组织。将肝癌组织按照按病理分化程度分为三组：低分化组、中分化组和高分化组。不限制年龄、性别。2.提取肝癌组织总RNA逆转录成cDNA,然后进行PCR扩增,每次PCR内参对照均选用GAPDH。获取电泳照片,使用Image J软件进行光密度扫描, a-SMA mRNA的相对表达强度计算方法为a-SMA mRNA的吸光度值与GAPDH吸光度值的比值,最后比较标本间的表达强度的差异。3.对于收集的石蜡切片按照说明书步骤,进行ACTA2及UCOO1kfo的原位杂交,以及α-SMA的免疫组化,应用BioSens Digital Imaging System进行图像灰度值分析观察。4.检验方法：采用SPSS17.0进行数举分析,计量资料采用均数±标准差(x±s)表示,两组比较采取t检验,多组间比较采用方差分析。结果1. RT-PCR结果显示a-SMAmRNA在所有肝癌组织中均呈阳性表达。对照肝脏组和肝癌组a-SMA mRNA表达的相对含量分别为0.24±0.01、0.62±0.03,t检验结果表明,两组差异有统计学意义(P<0.01)。2.免疫组化显示α-SMA在对照肝脏、肝癌组织和门脉癌栓组织的表达值分别为125.69±29.17、187.43±17.66、218.70±13.52,方差分析显示α-SMA表达差异有统计学意义(P<0.01),门脉癌栓组表达最高；按照肝脏病理分为三组：低分化组、中分化组和高分化组,表达值分别为237.14±25.83,190.57±19.90,165.67±22.64,方差分析显示α-SMA表达差异有统计学意义(P<0.01),在低分化组表达最高。3.原位杂交结果显示UC001kfo在肝硬化组不表达或低表达,在其它三组均为阳性表达,以上四组的表达值分别为113.30±11.79、137.59±6.23、148.78±8.23、160.28±9.47,方差分析显示UC001kfo表达差异有统计学意义(P<0.01),四组间的差异有统计学意义(P<0.01),分别为肝硬化组<癌旁组织<肝癌组<门脉癌栓组。ACTA2的表达值分别为109.89±9.74、125.22±32.16、149.06±8.43、156.57±8.86,ACTA2表达差异有统计学意义(P<0.01),四组间两两进行比较,差异有统计学意义(P<0.05),表达分别为肝硬化组<癌旁组织<肝癌组<门脉癌栓组。结论1.α-SMA在肝癌中表达明显增加,特别是门静脉癌栓组及低分化组,与肝癌的侵袭、转移有关。2.UC001kfo和ACTA2在肝癌中表达明显增加,特别是门静脉癌栓组,UC001kfo可能通过调控ACTA2的表达促进肝癌的侵袭转移。