【摘 要】
:
牛副流感病毒3型(Bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3)是一种非分节的单股负链RNA病毒,在世界分布广泛,是引起牛呼吸道综合征(Bovine respiratory disease complex,BRDC)的重要病原。BPIV3感染牛症状各异,轻者出现咳嗽发热等症状,严重的会引起继发的细菌感染,导致支气管细胞坏死,出现肺炎等状况。该病的广泛存在严重制约养
论文部分内容阅读
牛副流感病毒3型(Bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3)是一种非分节的单股负链RNA病毒,在世界分布广泛,是引起牛呼吸道综合征(Bovine respiratory disease complex,BRDC)的重要病原。BPIV3感染牛症状各异,轻者出现咳嗽发热等症状,严重的会引起继发的细菌感染,导致支气管细胞坏死,出现肺炎等状况。该病的广泛存在严重制约养牛产业的进一步发展,对养牛业的经济与发展造成了严重的损失。基于目前国内对BPIV3的研究较少,还没有商品化BPIV3检测试剂盒,国外虽有检测试剂盒,但检测成本较高。因此,建立一种具有自主知识产权的BPIV3血清学检测方法至关重要。另一方面,对BPIV3感染的研究离不开机制机理的研究,而检测BPIV3机理及基因功能的研究,需要定量检测蛋白的表达,但缺乏相应抗体。据报道,BPIV3的N蛋白是病毒核衣壳的主要成分,具有良好的免疫原性,可以用来制备检测抗体。因此本项目主要从三个方面进行研究。首先,进行N蛋白原核表达载体的构建与N蛋白的表达纯化。根据文献报道与对N基因生物信息学分析,本实验克隆了编码N蛋白388 aa~500 aa优势抗原区域基因,成功构建pET-32a-N原核表达载体,转化并获得重组表达截短的N蛋白的基因工程菌株。当IPTG浓度为1 mM,诱导时间为8 h的条件下该蛋白表达量较高,并主要以可溶性形式表达。纯化时采用Ni-NTA亲和层析方法,当用NPI 70溶液洗脱时蛋白纯化较好,成功制备浓度约为0.6 mg/mL的N蛋白。其次,制备N蛋白多克隆抗体。将制备的截短表达的N蛋白与弗氏佐剂1:1混合后免疫昆明小鼠,初次免疫后进行两次加强免疫,采取小鼠血液吸取血清。用该血清为一抗通过Western Blotting检测接种和未接种BPIV3的MDBK细胞样本,相较于未接种的细胞,该抗体与接种病毒细胞样本在约70 KDa左右处出现特异条带,与预期的N蛋白分子量一致,表明该多克隆抗体可作为Western Blotting抗体,用于BPIV3基础理论研究中N蛋白表达的检测。最后,建立可用来检测BPIV3的ELISA检测方法。经反复实验确定的优化条件为:抗原包被浓度1.4μg/mL,37℃包被2 h;10%马血清37℃封闭1.5 h;1:50稀释血清,37℃孵育1 h;1:2000稀释二抗,37℃孵育1 h;TMB显色15 min。重复性和特异性实验表明,该ELISA检测方法重复性好、特异性强,可用作BPIV3的初步检测。利用所建立的方法检测牛血清,与进口试剂盒相比较,总符合率为90.2%。用该方法检测来自天津的牛血清,阳性率达55.3%,该牛场BPIV3防控形势严峻。本研究原核表达、纯化了BPIV3 N蛋白,用其制备的多克隆抗体可为BPIV3基础理论研究中Western Blotting检测N蛋白表达时提供支持;利用N蛋白建立的ELISA检测方法,可初步用作BPIV3的检测,在一定程度上可降低检测成本,并为检测试剂盒的开发铺设条件。
其他文献
蛋白质水凝胶具有良好的生物相容性/可降解性,及低细胞毒性/免疫原性等,因此能应用于组织工程、药物释放、再生医学等领域。但较差的力学性能限制了蛋白质水凝胶发展与应用,而目前增强蛋白质水凝胶的方法存在一些不足,如方法不通用、缺少有效的能量耗散机制和来源单一等。牛血清白蛋白(BSA)含有丰富的可反应官能团,可以使用多种方法制备出水凝胶。因此本文选用BSA作为蛋白质模板,使用不同的方法制备了三种基于BSA
现场可编程门阵列(Field Programmable Gate Array,FPGA)供应链的全球化和FPGA的广泛应用引起了人们对于FPGA硬件安全问题的重视。目前存在一些以网表和RTL代码为研究对象的
随着计算机技术的飞速发展,网络应用系统中持续产生、传输和处理海量流数据。这些数据往往数据量大、类型多、流速快,且价值密度低。如何从大规模单体价值较低的数流据中获取
曲轴是内燃机的核心运动部件之一,曲轴的工作状态直接决定了发动机工作的稳定性与可靠性。本文以某直升机专用某V型双缸汽油机为研究对象,结合有限元法、多体动力学理论以及EHD理论,对曲轴的轴承润滑以及曲轴的疲劳耐久性能进行计算分析。通过分析曲轴在特殊工况下的轴承润滑性能以及曲轴疲劳寿命等,找出了曲轴的设计缺陷,进而对曲轴的设计缺陷提出了设计改进方案。通过对改进方案的计算分析,确保改进方案的可行性,为曲轴
物探处承担着全国不同地区区块的勘探任务,全公司的勘探设备根据业务不同分布于各地,由于各种设备工作环境恶劣,损坏状况严重,需要不定期送回物探处返修,调换新设备,出库入库
近年来,研究外源性小分子药物与蛋白质之间的相互作用已成为重要研究课题,美洛昔康(Meloxicam,简称MEL)是一种应用广泛的口服类药物,药物服用进入人体后会与体内的多种蛋白相接触并产生相互作用,本文以MEL与胃蛋白酶(Pepsin,简称PEP)、胰蛋白酶(Trypsin,简称TRP)、猪胰脂肪酶(Porcine pancreatic lipase,简称PPL)、α-淀粉酶(α-Amylase,
近些年来,多并苯分子由于具有较大的共轭结构和独特的π电子离域特征,因此可以作为新型光电材料广泛应用于有机发光二极管(OLED)、太阳能电池器件(OPV)、激光等诸多领域,备受科学家关注。然而,较大的多并苯分子溶解性稳定性以及抗氧化性能力相对较差,因此设计合成具有优良光物理化学性质的新型扭曲多并苯分子成为科学家探索的课题之一。一种方法是在芳烃分子主体骨架上引入杂原子,另外一个方法是将环戊二烯单元嵌入
目前,移动图书馆信息服务在我国还没有广泛开展起来,主要集中在经济水平较高、教育资源集中的一些地区,地域分布不平衡。国内移动图书馆的应用与发展始于2000年,2005年进入集
我国是肉牛养殖和消费的大国,肉牛的养殖量和存栏量均占全球总量一半以上。同时,由于牛肉是我国居民主要的肉类蛋白质来源之一,是人们赖以生存的生活必需品,其质量安全与百姓的身体健康息息相关,不容忽视。然而,目前我国对于包括牛肉在内的肉类产品管控多采取“终端检验”方式,而对于前期肉牛的饲养、屠宰等环节的监管十分欠缺,无法实现牛肉产品质量的快速追溯管理。本文将通过对我国牛肉产品生产环节及供应链的系统分析,构
随着电子信息技术的快速发展,片上多核处理器(Chip Multi-Processor,CMP)已经成为现代高性能微处理器的发展潮流。高速缓存(Cache)作为处理器和主存之间的重要桥梁,在计算机