造血包括原始造血和定向造血,是在有序且复杂的情况下发生的,该过程异常可能会导致各种类型的血液疾病。斑马鱼体型小,繁衍后代的能力强,胚胎在形态发生方面与人类极为相像,一些重要的调控因子和信号通路也非常保守,非常适合用于造血发育的研究。phf6基因的突变与多种血液疾病的发生有关。该基因所编码的蛋白在结构上拥有两个PHD结构域,突变多发生在这两个结构域内。虽然已有的研究表明phf6基因的突变与血液疾病的发生有一定的联系,但其具体的功能以及该基因是如何影响血液疾病发生的分子机制尚不明确。为了研究phf6基因在造血方面的作用,最初我们利用原位杂交检测了phf6基因的时空表达,然后进一步通过phf6的敲低与敲除实验来研究其在早期造血发生过程中的功能。首先将phf6 splicing morpholino与phf6 atg morpholino分别注射到斑马鱼单胞期胚胎中以降低phf6的表达,利用原位杂交、O-Dianisidine染色、中性红染色、qPCR等对不同造血时期特异性标记分子的表达进行检测,来探究phf6敲低后对早期造血发生的影响。结果表明,注射这两种morpholino后所检测的表型结果一致,即原始造血不受影响,而在定向造血过程中,红系血红蛋白减少,中性粒细胞减少,而巨噬细胞增多。进一步地,我们通过CRISPR/Cas9技术获得phf6突变体来研究其对早期造血发生的作用,目前已得到F0代。最后,依据对phf6相关因子的定量检测和研究,我们发现phf6敲低后,Notch1a、runx1的mRNA表达水平有一定程度的下降。前期研究表明runx1参与髓系细胞的分化,因此我们推测phf6很可能通过Notch-runx1信号通路影响髓系细胞的增殖和分化过程。