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目的研究熊果酸(Ursolic acid,UA)Pluronic F127纳米胶束(FUP)对大肠癌细胞生长的影响,并从分子水平探讨其作用机制,为熊果酸的进一步研发提供理论依据及实验基础,并为改进熊果酸剂型提供新的思路。方法1.熊果酸F127纳米胶束(FUP)的制备及表征:PluronicF127作为纳米载体,PEI改变电性,运用自组装法制备载UA的纳米胶束FUP。采用透射电子显微镜(TEM)观察胶束形貌;采用Nano ZS纳米粒度及Zeta电位仪测定分析其粒径大小、多分散性指数(PDI)以及Zeta电位等表征;采用傅里叶红外光谱测定FUP的红外吸收情况;采用高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)检测计算其载药量、包封率及体外药物释放率。2.FUP对大肠癌细胞生长的抑制作用:选用大肠癌细胞HCT116及HCT-8作为研究对象;采用MTT法评价FUP对大肠癌细胞活力的影响;通过倒置显微镜观察FUP对大肠癌细胞形态的影响;通过集落形成实验观察FUP对大肠癌细胞集落形成能力的影响;通过DAPI染色以及Annexin V/PI染色观察FUP对大肠癌细胞凋亡的影响;进一步通过检测细胞DNA含量,研究FUP对大肠癌细胞周期的影响;通过Western Blot检测FUP对大肠癌细胞中凋亡相关基因Fas、FasL及活化的caspase-8、caspase-3蛋白水平的影响。结果1.FUP的制备及表征:运用自组装法成功制备了纳米胶束FUP,采用TEM结果显示胶束成圆球状,大小较均匀;Nano ZS纳米粒度及Zeta电位仪测得其平均粒径为100.50±0.38nm,PDI为0.134,Z6t3电位为20.1±0.411mV;红外光谱图显示FUP中UA的存在;HPLC测定计算FUP的载药量为15.2±0.12%,包封率为36.64±0.26%;FUP的体外药物释放在初期(24 h)较快,然后进入缓释阶段,在第6天时,FUP的UA累计释放量为71.7%。2.FUP对大肠癌细胞生长的影响及其机制:经MTT法验证FUP对大肠癌细胞HCT116及HCT-8的活力具有明显的抑制作用(P<0.05),同等剂量(≤20μM)的UA及F127则无明显抑制作用;细胞形态学观察显示,与对照组比较,F127、UA均未明显降低细胞密度,而FUP可明显减少细胞数量;集落形成实验显示F127对细胞集落形成能力无抑制作用,UA及FUP对细胞集落形成能力的均有抑制作用(P<0.05),但FUP对HCT116及HCT-8细胞集落形成能力的抑制作用更强;DAPI染色以及Annexin V/PI染色提示F127、UA对细胞凋亡无明显影响,而FUP可增加细胞凋亡,且具有统计学差异(P<0.05),表明FUP对HCT116及HCT-8细胞凋亡的具有促进作用;细胞周期检测结果显示,F127、UA对细胞周期无影响,而FUP显著增加G1期细胞的比例,降低S期细胞的比例,使细胞周期阻滞于G1期,且具有统计学差异(P<0.05);Western Blot检测结果表明FUP能显著上调Fas、FasL及活化的caspase-8、caspase-3蛋白水平表达。结论运用自组装法成功制备了纳米胶束FUP,其粒径大小适中,分散性、稳定性好;FUP对大肠癌细胞活力、集落形成能力、增殖能力的抑制作用和对凋亡的促进作用优于相同剂量的UA,说明其具有提高UA生物利用度的作用;FUP促进HCT116、HCT-8细胞凋亡的作用可能与调控Fas、FasL的表达及caspase-8、caspase-3的活化有关。