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基因重组人表皮生长因子（recombinant human Epidermal Growth Factor,rhEGF）在医学上有显著的创伤修复、愈合伤口等功效。近年来发现，rhEGF在美容产品领域也有广阔的应用前景，具有促进皮肤细胞更新、防止皮肤衰老等功能。采用分泌型表达的基因工程大肠杆菌培养获得rhEGF，根据美容等日化行业对rhEGF的质量与纯度要求，设计了一条成本低廉、简便快速、能满足日化产品活性添加纯度要求的rhEGF分离工艺，得到了中等纯度的rhEGF冻干粉产品，并试制出含rhEGF的美容化妆品，观察了使用效果。 通过启发式方法设计了分离纯化rhEGF的工艺路线，包括基因工程大肠杆菌发酵液离心得到上清液、上清液盐析、透析脱盐、离子交换树脂层析、再脱盐、脱色和冻干等过程。通过正交和单因素试验考察了各因素的影响程度和最佳的水平。研究了中等纯度rhEGF冻干粉中rhEGF活性在不同温度、pH和稳定保护剂等条件下的变化，开发了在美容化妆品中添加rhEGF的关键工艺，并利用随机双盲法结合统计学分析研究了含rhEGF美容化妆品使用疗效的显著性。 中等纯度rhEGF冻干粉生产工艺的最佳操作条件为：1)rhEGF发酵液在4℃，6000rpm离心25min获得上清液（0.16-0.21g rhEGF／L）；2)上清液在冰浴中缓慢加入361g（NH4）2SO-4固体／L（60％饱和度）盐析，溶液pH控制在6.0，低速（60rpm）搅拌2h后静置4h，离心得到沉淀；3)沉淀用pH 7.4的磷酸盐缓冲液（PBS）溶解得rhEGF溶液，装满2／3透析袋脱盐，对透析液（水）的比例为1：40，每次透析2h，更换5次透析液后得到rhEGF盐析透析液（1.30-1.60grhEGF／L）；4)rhEGF盐析透析液经层高10cm（XK16／20）的凝胶型弱碱阴离子DEAE Sephadex-A50层析，流速控制在150mL／h，一次进杆体积75mL，用含0.5mol／L NaCl的PBS（pH7.4）洗脱得到rhEGF离交液（4.42-5.44g rhEGF／L）；5)经再次透析脱盐的rhEGF离交液流经层高7.5cm（XK16／20）的大孔型弱碱阴离子D314树脂脱色，溶液pH5.0，流速控制60mL／h，一次进样体积120mL，收集的流出液即rhEGF脱色液（3.54-4.35g rhEGF／L）；6)rhEGF脱色液冻干得到中等纯度的rhEGF冻干粉。通过以上分离提纯工艺，冻干粉产品rhEGF的纯度达到32％以上，整个工艺rhEGF得率53％以上。 实验表明rhEGF冻干粉中加入10％甘露醇、10％丝蛋白或1％低分子透明质酸钠可以减少rhEGF活性损失的50％以上（25℃室温下储存30天），而且与rhEGF有正协同美容效果。1％透明质酸（HA）与1％丝蛋白同时存在能使rhEGF水剂的有效治疗的浓度从300μg／mL降低到100μg／mL。统计学分析显示，rhEGF冻干粉水剂（含终浓度1％HA和1％丝蛋白）对治疗皮肤的粉刺、皱纹和衰老等浙江大学硕士学位论文＼自动少 摘要效果较好，使用前后差别有显著和高度显著性叩4．05刀．ofL 含 rhEGF美容化妆品中 rhEGF最佳添加量为终浓度 200pg rhEGF／mL，在生产结束前温度降至40℃左右时采用“微量稀释法”添加到中性的化妆品液体或营体中。含rhEGF美容化妆品使用30天后与使用不含rhEGF的化妆品对照组比较有显著差异，rhEGF美容化妆品总平均有效率为84．9％。 以上研究结果表明中等纯度rhEGF冻干粉符合美容化妆品的添加要求，分离操作简便，产品成本低廉。试制的含甘露醇、HA与丝蛋白保护和增效的rhEGF美容化妆品达到了预期的去痘修复。去现、＃L袁老与大田等效果，为fhEGF人规模用于R化产品打下了基础。