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背景:MiRNAs是一种22nt左右的多功能非编码RNA,能够与靶mRNA的3’UTR通过碱基互补配对的原则进行结合,抑制靶mRNA的翻译或导致mRNA降解,也能够分泌到细胞外介导细胞间的信息传递。MiRNAs能调控蛋白合成,影响多种信号通路,在肿瘤发生和代谢疾病中发挥着重要的作用,在疾病的早期检测、治疗、疾病进展监测以及机体对各种治疗的反应等方面具有重要的潜力和应用价值。近期研究表明miR-30b-5p与NAFLD患者脂代谢异常密切相关,在NAFLD细胞模型和小鼠模型中均观测到miR-30b-5p的表达下降,但miR-30b-5p对脂质代谢的影响还存在争议,在脂代谢中的具体作用机制尚不清楚。本研究的目的是探讨miR-30b-5p对肝癌细胞系Huh-7细胞脂质代谢的影响及其机制。材料和方法:不同浓度的FFAs(油酸:棕榈酸=2:1)处理细胞24h,提取各组细胞总RNAs并进行反转录,通过q RT-PCR的方检测miR-30b-5p的表达量,研究在Huh-7细胞和HepG2细胞中FFAs刺激的对mi R-30b-5p表达的影响。建立miR-30b-5p过表达和抑制的单克隆稳定细胞株。使用0.5mM FFAs对各组单克隆细胞株进行刺激,24h后通过油红O染色和TG浓度测定的方法检测miR-30b-5p对Huh-7细胞脂质沉积的影响,同时使用western blot法检测脂质代谢相关基因PPAR-α,SREBP-1,GULT1在各组细胞间的差异。使用starBase和mi RDB数据库预测miR-30b-5p的靶基因,用其中的PITA、microT、miRanda、TargetScan和miRDB预测的靶基因进行取交集,再通过DAVID及KOBAS网站进行基因富集分析,选取其中与脂质代谢相关的靶基因作为miR-30b-5p可能的靶基因。使用TargetScan数据库对靶mRNA与miR-30b-5p的结合部位进行预测,并使用western blot及qRT-PCR的方法对靶基因进行验证。结果:FFAs处理24小时后,Huh-7细胞和HepG2细胞中miR-30b-5p的表达显著下降,并且使用1.0mM浓度的FFAs处理细胞比0.5mM浓度的FFAs处理细胞能更明显的降低miR-30b-5p的表达。使用0.5mM FFAs处理稳定过表达miR-30b-5p的Huh-7细胞与对照组细胞24h后,油红染色结果显示过表达miR-30b-5p细胞中脂滴的含量减少,并且细胞内TG浓度显著降低。此外,western blot结果显示过表达组细胞内PPAR-α表达增加,SREBP-1表达减少,GLUT1的表达没有显著性差异。使用0.5mM FFAs处理mi R-30b-5p稳定抑制的Huh-7细胞与对照组细胞24h后,油红染色结果显示两组细胞中脂质积累差异无统计学意义,并且细胞内TG含量无明显变化,western blot结果显示mi R-30b-5p稳定抑制的Huh-7细胞内PPAR-α表达减少,SREBP-1与GLUT1的表达增加。通过star Base和miRDB数据库预测miR-30b-5p的靶基因,并对PITA、microT、miRanda、TargetScan和miRDB进行交集并获得603个基因,再通过DAVID和KOBAS网站进行基因富集分析,获得41个与脂质代谢相关的基因。Western blot及qRT-PCR的结果显示miR-30b-5p过表达组细胞PPARGC1A表达下降,miR-30b-5p抑制组细胞PPARGC1A升高,表明mi R-30b-5p可调节PPARGC1A的表达。结论:游离脂肪酸刺激可显著降低Huh-7细胞和HepG2细胞中miR-30b-5p的表达。Huh-7细胞MiR-30b-5p过表达可减少细胞内脂质累积,并上调脂质代谢相关基因PPAR-α的表达,同时抑制SREBP-1的表达。此外,实验结果显示,miR-30b-5p可能通过调控PPARGC1A基因从而调节Huh-7细胞内的脂质代谢。