目的①探索建立小鼠军团菌感染模型的条件。②初步阐明TLR2、TLR4在军团菌感染的作用机制,了解军团菌感染作用的分子靶点,为军团菌病的防治提供依据。③探讨相关细胞因子(IL-6、TNF-α)在小鼠军团菌感染中的作用。方法1.从北京维通利华实验动物技术有限公司购买80只6-7周SPF级BALB/C小鼠,每组8只,雌雄各半。其中40只小鼠采用鼻内接种50ul 1.2×109/ml军团菌菌悬液,作为染菌组,建立军团菌感染模型,军团菌菌悬液的浓度根据麦氏比浊管确定。另外40只小鼠鼻内接种50ul无菌生理盐水作为对照组,分别于12小时、1天、3天、5天、7天麻醉小鼠,摘取眼球取血,解剖小鼠。2.对染菌组和对照组的小鼠,分别于12小时、1天、3天、5天、7天处死,并进行下述研究:①取左肺上叶、肾脏、脾脏、肝脏少许,固定做病理切片。②采用Real-time RT PCR法测定小鼠肺组织中TLR2、TLR4、MyD88 mRNA的表达水平。③ELISA法检测小鼠肺组织匀浆液中细胞因子(IL-6、TNF-α)表达水平。3.采用SPSS16.0统计软件进行数据的录入和分析。结果①病理切片结果显示:染菌组小鼠肺组织间质有炎性细胞浸润,且随着时间延长炎症有所加重,肺毛细血管壁有血管出血,说明造模成功。染菌组小鼠肾脏肾小球内有出血,且有炎性细胞浸润。染菌组小鼠脾脏髓质内可见出血,中性粒细胞浸润。尚未见染菌组小鼠肝脏有病理改变。②脏器系数结果显示:染菌组和对照组之间肺脏脏器系数差异有统计学意义(F=13.987,P<0.001),各个时间点差异有统计学意义(F=3.035,P=0.023),分组和时间点交互作用差异无统计学意义(F=1.232,P=0.305)。染菌组和对照组之间脾脏脏器系数差异有统计学意义(F=40.585,P<0.001),各个时间点之间差异有统计学意义(F=4.525,P=0.003),分组和时间点之间交互作用差异无统计学意义(F=1.173,P=0.330)。染菌组和对照组之间肾脏脏器系数差异有统计学意义(F=20.473,P<0.001),各个时间点之间差异有统计学意义(F=5.025,P=0.001),分组和时间点之间交互作用差异无统计学意义(F=1.131,P=0.274)。染菌组和对照组之间心脏脏器系数差异无统计学意义(F=0.061,P=0.805),各个时间点之间差异也无统计学意义(F=1.528,P=0.204),分组和时间点之间交互作用差异无统计学意义(F=1.144,P=0.343)。染菌组和对照组之间肝脏脏器系数差异无统计学意义(F=0.590,P=0.478),各个时间点之间差异有统计学意义(F=37.952,P<0.001),分组和时间点之间交互作用差异无统计学意义(F=2.303,P=0.067)。染菌组和对照组之间脑脏器系数差异无统计学意义(F=0.031,P=0.861),各个时间点之间差异无统计学意义(F=1.221,P=0.310),分组和时间点之间交互作用差异无统计学意义(F=0.355,P=0.840)。③比较染菌组和对照组TLR2、TLR4、MyD88 mRNA相对表达量,real-time RT-PCR检测结果显示在染菌组和对照组小鼠肺组织TLR2 mRNA之间表达水平差异无统计学意义(F=0.032,P=0.858),各个时间点差异无统计学意义(F=0.068,P=0.991),分组和时间点之间交互作用差异无统计学意义(F=0.269,P=0.897)。染菌组和对照组小鼠肺组织TLR4 mRNA表达水平差异无统计学意义(F=0.321,P=0.573),各个时间点差异无统计学意义(F=0.443,P=0.777),分组和时间点之间交互作用差异无统计学意义(F=0.616,P=0.625)。染菌组和对照组肺组织MyD88 mRNA表达水平差异无统计学意义(F=0.711,P=0.402),各个时间点差异无统计学意义(F=0.367,P=0.831),分组和时间点之间交互作用差异无统计学意义(F=1.031,P=0.398)。④染菌组和对照组小鼠肺组织IL-6的浓度差异有统计学意义(F=69.18,P<0.001),各个时间点差异有统计学意义(F=5.289,P<0.001),分组和时间点之间交互作用差异有统计学意义(F=8.686,P<0.001)。染菌组和对照组小鼠肺组织TNF-α的浓度差异有统计学意义(F=24.6,P<0.001),各个时间点差异有统计学意义(F=14.230,P<0.001),分组和时间点之间交互作用差异有统计学意义(F=13.987,P<0.001)。结论:①通过鼻内接种50ul 1.2×109/ml军团菌菌悬液能够建立军团菌感染的小鼠模型。②本次研究尚未发现TLR2、TLR4、MyD88参与抗军团菌感染。③IL-6和TNF-α与军团菌感染有关。