【摘 要】
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背景民以食为天,食以安为先,食品安全事关千万家户的安全。目前,食品种类丰富多样,同时在食品中也会存在不同类型的有害因素,其中,丙烯酰胺和真菌毒素对食品的污染已成为全球关注的公共健康问题,当食品中含有丙烯酰胺或者真菌毒素时,不仅能够引起食品营养成分和食用价值降低,还可能导致基因突变、癌症和畸形的发生,危害人体的健康与生命,因此高效的食品安全检测技术是保护人类免受丙烯酰胺和真菌毒素毒害的有力手段。目的
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背景民以食为天,食以安为先,食品安全事关千万家户的安全。目前,食品种类丰富多样,同时在食品中也会存在不同类型的有害因素,其中,丙烯酰胺和真菌毒素对食品的污染已成为全球关注的公共健康问题,当食品中含有丙烯酰胺或者真菌毒素时,不仅能够引起食品营养成分和食用价值降低,还可能导致基因突变、癌症和畸形的发生,危害人体的健康与生命,因此高效的食品安全检测技术是保护人类免受丙烯酰胺和真菌毒素毒害的有力手段。目的（1）将阳离子共轭荧光聚合物与磁分离技术相结合达到对于目标核酸的信号放大检测,极大地缩短检测时间,提高检测的效率。（2）构建基于核酸探针的信号放大体系并应用于食品毒素分析的新方法;构建灵敏度高、背景低、制备容易、特异性强、可通用的毒素分析方法。方法（1）利用磁分离和阳离子共轭荧光聚合物检测赭曲霉毒素A（Ochratoxin A,OTA）。将针对OTA的氨基标记适配体（Aptamer,Apt）固定在磁珠（Magnetic Beads,MBs）上以形成Apt-MBs型共轭复合物。固定化适配体可与羧荧光素标记的DNA（carboxyfluorescein-labeled DNA,FAM-DNA）部分互补,OTA将与适配体结合并阻止Apt-DNA和FAM-DNA之间的杂交,这导致磁分离后上清液中存在大量FAM-DNA,在添加荧光聚合物时,能发生有效的荧光共振能量转移（Fluorescence resonance energy transfer,FRET）（2）基于核酸探针的荧光生物分析方法。以丙烯酰胺（Acrylamide,ACR）为检测对象,设计两条单链P1-DNA和P2-DNA,ACR将与核酸链P1结合,P2将不能与P1杂交成双链,核酸外切酶Ⅲ（Exonuclease III,Exo III）也不能降解P1和P2两条单链核酸,此时荧光聚合物将和P2链结合,从而使荧光聚合物与P2上的荧光素结合产生FRET。通过荧光聚合物与FAM的能量转移产生的荧光变化,即可用于ACR的定量检测。结果（1）通过对阳离子共轭聚合物PFP的浓度、FAM-DNA的浓度、磁珠剂量的参数优化,检测到在波长530 nm处的荧光强度容易实现OTA检测,530 nm处的荧光强度随OTA浓度从0.167-67 ng/m L呈线性增加,线性方程为y=19.22x+716.4,R~2=0.996,检出限:0.11 ng/m L。（2）通过对P1浓度、Exo III量、荧光共轭聚合物PFP的体积的参数优化,Exo III的最佳活力是8 U,荧光共轭聚合物PFP的最佳体积为10μL,相应ACR的最佳孵育时间是60 min,根据血清样品中对ACR进行定量检测,其线性范围为6.7～67μM,线性方程为:y=0.0086x+0.57,R~2=0.970,检出限:1.3μM。结论（1）通过阳离子共轭聚合物PFP和磁分离技术构建了一种用于检测OTA的荧光适体分析法。在波长530 nm处的荧光强度容易实现OTA检测,即在波长530 nm处,OTA的检出限可低至0.11 ng/m L,低于不含PFP的适体分析,该适配体分析显示对其他常见真菌毒素具有良好的选择性,将其应用于实际样品中,取得了满意的结果。（2）基于核酸外切酶III与荧光共轭聚合物对ACR的检测方法简单快速,具有较好的检测选择性,可以在复杂的血清样品中检测到目标物,具有一定的实际应用价值。
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