南方地区无核葡萄胚挽救影响因子研究

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无核葡萄基本无核或仅带有小而软的残核,果皮薄,风味好,在鲜食、制干或者制罐方面都占有独特优势,具有良好的经济效益。随着无核葡萄市场需求逐年增加,生产品种供给不足,无核葡萄的育种成为葡萄育种研究的重要方向。但是,因无核葡萄合子胚中途败育无法得到种子使传统育种难度增大,只能以有核品种作为母本与其杂交,后代无核比率低且育种时间长。胚挽救技术作为无核葡萄育种的重要手段,因其局限性小,周期短效率高,得到越来越广泛的重视和应用,关于胚挽救程序及影响因子的研究也日益深入。本试验以5个无核品种为试材,通过对形态学特征的观察和胚培养条件的研究,筛选最佳取样时间和母本基因型,探索胚挽救的最佳条件,并对继代培养和移栽炼苗进行深入分析,对南方地区的胚挽救技术加以完善。主要研究内容和取得结果如下:1、对火焰无核、奥迪亚无核、红宝石无核、碧香无核、SP557进行形态学测定,结合物候期,并进一步利用胚培养试验确定了南方地区无核葡萄进行胚挽救的取样时间和基因型。结果表明,多数欧亚种无核葡萄为花后30-40d,红宝石无核杂交种为授粉后40-50d;适宜进行胚挽救的基因型有火焰无核、碧香无核和奥迪亚无核,其中火焰无核×寒香蜜成苗率最高可达60%以上。2、以火焰无核为主要材料,对物候期及生长结实特性进行调查,并在前期研究的基础上,对果实单果重和种子重量、数目、纵横径以及外观形态进行了相关性分析,观察胚珠的败育过程,确定了开始败育时间为花后31d。3、确定了初代培养的影响因素。以火焰无核×寒香蜜杂交幼果为试材,对胚挽救初代培养过程中的影响因子如培养基、接种时间、生长调节剂浓度、培养环境等进行研究。结果表明,最佳胚珠取样时间在授粉后35d,最佳培养条件为:液态B5培养基+60g/L蔗糖+1.0mg/L GA3+0.2mg/L 6-BA+2.0mg/L IBA+1g/LAC,培养环境为光暗培养。另外,花前进行摘心、环剥和250mg/L烯效唑处理可以明显提高胚发育率和成苗率,接种前进行10d的4℃低温处理也可以优化胚挽救的效果。4、确定了继代培养的最佳条件。研究了火焰无核x寒香蜜胚挽救苗继代过程中的影响因素,包括培养基、激素浓度和接种方式。研究结果表明:在培养基中添加IBA有利于幼苗生长,其中0.2mg/L效果最好。综合分析确定继代培养基为:1/2WPM+0.2mg/L IBA +30g/L蔗糖+6G/L琼脂+2.5G/L AC,采用双芽接种。5、建立了胚挽救苗程序移栽法。采用‘培养瓶内密闭2d→培养瓶内开口2d→出培养瓶7d→自然7d’的程序化炼苗方式,长出2片新叶后移入大田,基质使用HAWITA泥炭,炼苗过程中使用1/2MS大量元素和多菌灵浇灌,成活率可达90%以上。
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