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前言 早期发现散播于血循环、淋巴道、骨髓、腹腔及各种组织器官中微量肿瘤细胞,可为估计肿瘤复发及预后提供有价值依据。逆转录聚合酶链式反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)用于检测肿瘤特异性和组织特异性基因表达敏感性高,操作简单。可有效检出胃癌淋巴结、骨髓、腹腔冲洗液及外周血中的微量癌细胞。本研究采用RT-PCR方法联合检测了胃癌患者胃周静脉血中肿瘤特异性基因CEA和组织特异性基因CK20的表达情况,探讨了应用RT-PCR方法检测胃癌患者血循环中微量癌细胞的意义及胃周静脉血中CK20和CEA mRNA表达的临床意义。 材料和方法 1.实验材料 本研究收集中国医科大学第一临床学院肿瘤科胃癌患者胃周静脉血标本(取自胃网膜右静脉)36例。随机选取10例胃癌组织标本和2例胃癌肝转移患者胃周静脉血标本作阳性对照。10例胃良性病变患者胃周静脉血标本作阴性对照。 2.实验方法 开腹探查后立即采取胃网膜右静脉血10ml,肝素抗凝,应用密度梯度离心法分离血液中的有核细胞,提取其总RNA,RT-PCR反应后,2%琼脂糖凝胶电泳,溴乙啶染色,紫外光下照相记录。胃癌患者胃周静脉血中CK20和CEA mRNA的表达与胃癌病理生物学特点间的关系采用扩检验,P<0.05认为有显著差异。 实验结果 一人K20和CEA mRNA表达的特异性 10例胃癌组织和2例胃癌肝转移患者胃周静脉血中CK20和CEA mRNA表达均阳性;10例胃良性病变患者胃周静脉血 CK20和 CEA mRNA表达均阴性。 二人K20和CEA mRNA在胃癌患者胃周静脉血中表达情况 36例胃癌患者 CK20 mRNA表达阳性者 28例门.8%h CEAInRNA表达阳性者21例门8.3%人CK20和CEA rllnixA表达均阳性者 13例门6.1%h CK20和/或 CEA mRNA表达阳性者 32例抢8.9%人 胃癌患者与胃良性病变患者胃周静脉血中CK20和优Am RNRNA表达在统计学上有显著差异P<O.01人 三\胃癌患者胃周静脉血中 CK20和CEA mRNA表达与胃癌病理生物学特点间的关系 CmolnR *A的阳性率在肿瘤<scm时为58.3呢 */12),>scm时为70.8%门 八限局型为100%门/2入浸润型为65.5%门 八分化良好者为60%K八 X分化不良者为69.2%*/26);浸润深度:m~ ss者为 70畅(21/30),sc者为 50畅(3/6);团块状生长者为80%N/5L巢状、弥漫状生长者为64.5%p0/31厂淋巴结转移站:S N;者为53.3%(8八5人ZN。者为刀.7%门4八 八淋巴结转移数刃-6个者为68.2%门 X6个以上者为58.3阮(7/12);TNM分期:I+ 11期者为73.7%(14/19),亚十IV期者为53.3%侣八人 CK20 mRNA阳性率在肿瘤>scm,限局型,分化不良,团块状生长和淋巴结转移第二站以上时明显增加,但统计学上无显著差异瞩叩.%八 CEA mRNA的阳性率在肿瘤<scm时为 50%(6/12),35cm ·2· 时为62.5%门 八限局型为0%(0/2入浸润型为刀.4% K1/29h分化良好者为60%K八 X分化不良者为57.7%门5/ 26);浸润深度;m-ss者为 53.3%(16/30),sc者为 83.3畅(5/ 6h团块状生长者为20%门/5入巢状、弥漫状生长者为64.5% 闪0/3八淋巴结转移站:S N;者为53.3%门八 LZ N。者为 73.7阮(12/19);淋巴结转移数:0一6个者为45.5畅(1M2),6个 以上者为 75%(9/12);TNM分期:I+11期者为 36.8阮 (/19), 皿+IV期者为 80%O2八5人 CEA mRNA在胃癌患者胃周静脉血 中的阳性率在肿瘤 3 5 cm,浸润型,浸润深度 sc,巢状、弥漫状生 长,淋巴结转移第二站以上者,淋巴结转移数6个以上和’INM分 期皿+IV时增加明显。CEA mRNA的阳性率只与胃癌大体分型 及**M分期间在统计学上有显著差异汀<o.m八 *KZ 0和0*Am RNRNA的阳性率在肿 瘤<scm时为33.3阮 (4/12),>scm时为37.5%(9/24);限局型为0呢(0/2),浸润型 为44.8%门 厂分化良好者为40%u八 入分化不良者为 34*酌(9/26);浸润深度:m-ss者为36.7%(11/30),sc者为 33.3%p/6h团块状生长者为 20%O/5入巢状、弥漫状生长者为 38.7%0 八淋巴结转移站:SN;者为20%p八5X)N。者为 42.1啪(8/19);淋巴结转移数:0-6个者为 22.7%(5/22),6个以 上者为50%(6/12);TNM分期:I+11期者为26.3阮(5/19),皿 +W期者为 40%K八5人 C删和 CEA mRNA的阳性率在肿瘤 k 5 cm,浸润型,巢状、弥漫状生长,淋巴结转移第 H站以上,淋巴 结转移数6个以上和TNM分期皿+w期时明显增加,统计学上均 无显著差异汀>0.05入与优A m RNRNA阳性率和病理生物学特点 间的关系相似,但其阳性率较单一的CK20或CEA InRNA?