论文部分内容阅读
奶牛乳腺炎一直是导致奶牛业经济损失最严重的主要疾病之一。目前，药物治疗是控制奶牛乳腺炎的主要措施，但事实上，药物治疗的效果由于经济和生产损失很难令人满意。人们逐渐意识到疫苗预防将会成为未来奶牛乳腺炎综合防制的重要措施之一，近年来已有不少的相关报道。本实验从分离鉴定本地区引起奶牛乳腺炎的主要病原菌入手，从采自南宁地区两个奶牛场的50份病样中分离出金黄色葡萄球菌(Staphylococcus. aureus)、无乳链球菌(Streptococcus. agalactiae)、停乳链球菌(Streptococcus. dysgacactjae)、乳房链球菌(Streptococcus. uberis)和大肠杆菌(Escherichia.coli)等主要病原菌。通过药敏实验证实，金黄色葡萄球菌对环丙沙星，庆大霉素和头孢氨苄高度敏感；大肠杆菌主要对链霉素，环丙沙星，庆大霉素和头孢氨苄高度敏感；无乳链球菌主要对头孢氨苄和环丙沙星高度敏感；停乳链球菌对头孢氨苄高度敏感；乳房链球菌主要对链霉素，卡那霉素，环丙沙星，庆大霉素和头孢氨苄高度敏感。测定无乳链球菌的生长曲线，发现在37℃培养20小时，细菌数达到最大值。对分离菌株进行毒力测定，腹腔注射0.2ml浓度为5×10~8cfu／ml无乳链球菌能致死小鼠，金黄色葡萄球菌和停乳链球菌导致明显的全身症状；无乳链球菌，停乳链球菌和金黄色葡萄球菌均导致严重的关节炎症，乳房链球菌的毒力比较弱。根据细菌的毒力强弱筛选出制苗株金黄色葡萄球菌，无乳链球菌，停乳链球菌，乳房链球菌各一株。测定金黄色葡萄球菌甲醛灭活的最佳条件是在37℃用0.4％的甲醛灭活24h。随后结合蜂胶佐剂，研制了预防奶牛乳腺炎的蜂胶佐剂灭活疫苗，并进行了安全性、稳定性和无菌检验，证明该疫苗安全、稳定。并建立了检测抗体效价的间接ELISA方法，在二免后7天，血清中针对四种细菌的特异性抗体效价均达到1：6400。利用小鼠关节炎模型实验证明，该疫苗能对用同源细菌攻毒的小白鼠提供75％的保护力。