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目的:研究Notch1基因转染的人脐带间充质干细胞(Huc-MSCs)通过尾静脉注射方法对SD(Sprague Dawley)大鼠缺血性脑血管病神经功能缺损恢复的影响,为缺血性脑血管病的临床治疗提供实验依据。方法:用组织块贴壁法进行原代培养Huc-MSCs,在移植干细胞前将携带Notch1基因的载体质粒DNA(pcDNA3.1-EGFP-AMP)转染Huc-MSCs备用,并在荧光显微下观察Huc-MSCs转染后荧光表达情况。在移植后1个月,分别通过实时定量PCR、免疫印迹(Western blot)来检测大鼠脑组织中Notch1 mRNA及其蛋白在大鼠脑内的表达情况。采用改良线栓法制作健康雄性SD大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,用TTC染色进一步判断脑缺血的部位以及范围是否与大脑中动脉供血区域相一致。根据Zea Longa神经功能评分测得SD大鼠得分,并将达到标准的40只SD大鼠模型随机分为4组[即转染Notch1基因组(移植A组)、人间充质干细胞组(移植B组)、转染空质粒组(移植C组)、不作处理组(阴性对照组)]。移植组均在造模7天后,通过尾静脉注射移植方法将Huc-MSCs植入大鼠身体,阴性对照组不作处理。在移植后第3天、1周、2周、1月采用神经功能损伤程度评分(mNSS)方法检测大鼠神经系统功能缺损恢复情况。结果:1、通过组织块贴壁筛法在体外分离、培养原代人脐带间充质干细胞,经流式细胞仪检测,结果显示细胞明显表达CD44、CDl05,不表达CD45、CD34,证实了培养的细胞符合人脐带间充质干细胞的形态及细胞表面标记物等特性,可以验证所得到的细胞为脐带间充质干细胞,这表明Huc-MSCs可以在体外进行传代并增殖,具备较好的自我更新能力及多向分化能力。2、用改良线栓法制作大脑中动脉闭塞模型后,SD大鼠神经功能缺损较明显。TTC检测右侧的纹状体及皮层区苍白,即造模成功。3、通过观察测序结果与标准序列进行比对的峰图及双酶切验证图,结果显示已成功将Notch1基因构建于载体质粒DNA(pcDNA3.1-EGFP-AMP)中。4、Notch1基因移植组移植后1周、2周、1月,移植A组mNSS评分低于阴性对照组,差异有明显统计学意义(P<0.05)。移植B组及移植C组mNSS评分与阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);移植后1周、2周、1月,移植A组mNSS评分明显低于移植B组及移植C组且差异有统计学意义(P<0.05)。5、在移植Notch1基因1个月后,移植A组通过实时定量PCR检测到Notch1 mRNA的表达量明显增加,通过免疫印迹法检测到Notch1蛋白的表达量明显增加,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:Notch1基因转染的人脐带间充质干细胞(Huc-MSCs)经尾静脉注射移植法可以在大鼠脑内存活并表达,且可以提高SD大鼠行为学功能评分,改善神经功能缺损情况。