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目的:1.建立LC-MS/MS法分析检测不同年份青砖茶多糖中单糖种类及含量。2.青砖茶多糖-铁（Ⅲ）络合物制备及抗氧化作用研究。方法:1.青砖茶多糖提取:水提醇沉法提取多糖,Sevage法除蛋白,得到青砖茶多糖。2.LC-MS/MS法分析不同年份（2年、5年和11年）青砖茶多糖中单糖成分及其含量:（1）基于LC-MS/MS检测青砖茶多糖单糖方法建立:色谱柱:shim-pack VP-ODS228-34937-92（5.0μm,250 mm×4.6 mm i.d.）.,流动相A:82%-乙酸铵（5 mmol/L）,流动相B:18%-乙腈,流速:0.9 m L/min等度洗脱,柱温:27℃,进样体积:2μL;1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）柱前衍生和电喷雾离子源进行正离子模式检测,多反应检测模式进行定量分析;并进行专属性、线性、最低定量下限、精密度、准确度和稳定性等方法学考察与验证。（2）青砖茶多糖中单糖样品制备:青砖茶粗多糖通过盐酸水解,得到青砖茶单糖样品溶液并进行PMP衍生化,通过单因素试验筛选酸水解条件及衍生化条件。（3）不同年份青砖茶多糖中样品含量测定:分别取不同年份青砖茶多糖中单糖衍生化后样品溶液和内标物溶液体积按5:1充分混匀,过0.22μm滤膜,进行液质分析。不同年份样品,分别进样6次,记录峰面积并计算各单糖含量。3.青砖茶多糖-铁（Ⅲ）络合物制备及理化性质分析:（1）青砖茶多糖-铁（Ⅲ）络合物制备:青砖茶多糖与三氯化铁在碱性条件下,用60℃磁力搅拌器搅拌,制得青砖茶多糖-铁（Ⅲ）络合物;单因素试验考察酸碱度、温度、时间,青砖茶多糖与柠檬酸钠质量比对络合物含铁量的影响;紫外-可见光谱,傅里叶红外光谱对青砖茶多糖-铁（Ⅲ）络合物进行结构鉴定。（2）青砖茶多糖-铁（Ⅲ）络合物理化性质分析:观察青砖茶多糖-铁（Ⅲ）络合物的颜色、状态及在不同溶剂中的溶解性,分析青砖茶多糖-铁（Ⅲ）络合物的一般性质;向青砖茶多糖-铁（Ⅲ）络合物中滴加硫氰酸钾溶液和氢氧化钠溶液,分析青砖茶多糖-铁（Ⅲ）络合物稳定性。4.青砖茶多糖-铁（Ⅲ）络合物抗氧化实验:通过观察青砖茶多糖-铁（Ⅲ）络合物对DPPH（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼,1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl）自由基清除能力、超氧阴离子自由基清除能力、羟基自由基清除能力和对脂质过氧化抑制能力评价青砖茶多糖-铁（Ⅲ）络合物的抗氧化作用。结果:1.LC-MS/MS法分析不同年份（2年、5年和11年）青砖茶多糖中单糖成分及其含量:（1）PMP标记的单糖衍生物,在正离子模式下,显示出强烈的分子离子峰[M+2PMP-H2O+H]+和子离子为m/z 175.20[PMP+H]+的二级碎片,鉴定分离出青砖茶多糖样品中含甘露糖（Mannose,Man）、核糖（Ribose,Rib）、鼠李糖（Rhamnose,Rha）、半乳糖醛酸（Galacturonic Acid,Gal UA）、葡萄糖（Glucose,Glu）、半乳糖（Galactose,Gal）、木糖（Xylose,Xyl）、阿拉伯糖（Arabinose,Ara）和岩藻糖（Fucose,Fuc）9种单糖。甘露糖、葡萄糖、半乳糖,MS跃迁为m/z 511.40→175.20;核糖、木糖、阿拉伯糖,MS跃迁为m/z 481.36→175.20;鼠李糖、岩藻糖,MS跃迁为m/z 495.20→175.20;半乳糖醛酸、葡萄糖醛酸,MS跃迁为m/z 525.40→175.20;方法学验证结果显示:本研究所优化的LC-MS/MS条件具有良好的专属性,9种单糖能有效的分离,其分离度均大于1.5;9种分析物在20.0～1000.0μg/m L范围内均具有良好的线性关系（r＞0.9900）且最低定量下限（LLOQ）为20μg/m L;分析物日内精密度的相对标准偏差（RSD）值为0.47%-3.55%,回收率为85.3%-113.6%;连续三天精密度的RSD值为2.47%-14.79%,回收率为85.6%-114.6%;稳定性结果显示:4℃条件下储存24 h和48 h后,分析物的RSD分别为0.28%-9.71%和1.10%-13.66%。（2）当PMP-甲醇溶液浓度为0.5 mol/L时,单糖衍生较为完全;当HCl浓度为2 mol/L,反应时间为2 h,反应温度为90℃时,多糖水解较为完全。（3）不同年份青砖茶（2年、5年和11年）中均含有上述9种单糖,其中2年青砖茶中各单糖含量比为:Man:Rib:Rha:Gal UA:Glu:Gal:Xyl:Ara:Fuc=0.20:0.15:0.13:0.35:1.02:0.50:0.12:0.43:0.11;5年青砖茶中各单糖含量比为:Man:Rib:Rha:Gal UA:Glu:Gal:Xyl:Ara:Fuc=0.28:0.25:0.19:0.71:1.58:1.30:0.24:0.94:0.23;11年青砖茶中各单糖含量比为:Man:Rib:Rha:Gal UA:Glu:Gal:Xyl:Ara:Fuc=0.87:0.32:0.52:2.70:4.60:4.10:0.33:2.84:0.27。Glu,Gal,Ara,Gal UA 4种单糖是青砖茶多糖的主要成分,Rib和Fuc是青砖茶多糖中未见报道的两种单糖。另外,不同年份青砖茶多糖样品中9种单糖含量为11年＞5年＞2年。2.青砖茶多糖-铁（Ⅲ）络合物制备及理化性质分析:（1）邻菲罗啉紫外分光光度法测定青砖茶多糖-铁（Ⅲ）络合物含铁量为32.20%;单因素试验,确定青砖茶多糖-铁（Ⅲ）的最佳络合条件:时间1 h、温度60℃、p H值为8,青砖茶多糖与柠檬酸钠质量比2:1;紫外可见光谱测定结果显示,青砖茶多糖与Fe3+已成功络合;傅里叶红外光谱结果显示在861 cm-1处,青砖茶多糖-铁（Ⅲ）有β-Fe OOH特征吸收峰,证实青砖茶多糖与Fe3+已成功络合;（2）青砖茶多糖-铁（Ⅲ）络合物为红棕色粉末,无臭无味,在水中极易溶解（且溶解后的水溶液呈中性）,在无水乙醇、无水甲醇、乙醚等有机溶剂中不易溶解;在青砖茶多糖-铁（Ⅲ）络合物的水溶液中,滴加硫氰酸钾溶液和氢氧化钠溶液,溶液均未发生变化。3.青砖茶多糖-铁（Ⅲ）络合物抗氧化实验:青砖茶多糖-铁（Ⅲ）络合物对DPPH自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基清除率及对脂质过氧化抑制率均比青砖茶多糖高,青砖茶多糖和青砖茶多糖-铁（Ⅲ）络合物对DPPH自由基的最大清除率为21.56%和82.23%、对羟基自由基的最大清除率为36.76%和60.62%、对超氧阴离子自由基的最大清除率为52.75%和84.21%,对脂质过氧化的抑制率最大为32.01%和81.9%。结论:1.LC-MS/MS法测定青砖茶多糖中单糖成分及含量测定结果准确,快速,高效;2.青砖茶多糖样品中含甘露糖、核糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖和岩藻糖9种单糖,主要成分为葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖和半乳糖醛酸4种单糖;青砖茶储存时间愈长,茶多糖中9种单糖含量愈高;3.青砖茶多糖经Fe3+络合修饰后,结构更加稳定,可显著提高体外抗氧化活性;青砖茶多糖-铁（Ⅲ）络合物对DPPH自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基的清除作用和对脂质过氧化的抑制作用均优于青砖茶多糖。