纤维素是一种可再生的资源,含量巨大,资源极其丰富。人们一直在探索如何充分高效利用该资源。纤维素酶在生物能源、纺织、食品、畜牧等行业被广泛使用,目前利用纤维素酶催化纤维素降解进而生产生物新能源是研究的热点课题之一。高效降解纤维素的纤维素酶是该课题的核心问题。本研究从腐枝样本中,利用底物平板的筛选方法,筛选得到了一株对纤维素降解活力强的细菌菌株,采用16S r DNA和gyr B基因进行分子鉴定,鉴定并命名其为Bacillus cereus strain M-3。克隆菌株M-3的内切纤维素酶基因,命名为egt。通过对基因序列进行分析,本研究首次发现了自然界中存在的在结合区前端有一个8 bp的缺失,导致移码,且蛋白翻译提前终止的纤维素新突变基因egt。利用Overlapping PCR技术,合成无突变的纤维素酶基因命名为egf。将突变的纤维素酶基因egt和无突变的egf,构建原核表达载体,转化到大肠杆菌BL21（DE3）中,进行异源表达,比较两种纤维素酶之间的区别。基因egt全长为1146 bp,编码翻译381个氨基酸,蛋白分子量为40.06 k Da。具有催化结构域、连接区和部分结合区。基因egf全长1500 bp,编码翻译499个氨基酸。具有催化结构域、连接区和完整的结合区,蛋白分子量为56.21 k Da。纤维素酶EGT和EGF均仅具有羧甲基纤维素降解活性,无脱脂棉酶、微晶纤维素酶、滤纸酶和葡萄糖苷酶水解活性。不同条件对工程菌E.coli/pET-egt和E.coli/pET-egf产酶的影响。实验发现,该工程菌均在诱导6小时后,产酶量可达到最高;诱导剂IPTG最适诱导终浓度为0.4 m M;诱导温度对工程菌的产酶影响不大;工程菌株E.coli pET-egt最适初始培养基p H和最适诱导p H值均为7.0,而E.coli pET-egf最适初始培养基p H和最适诱导p H值菌为8.0。纤维素酶EGT和EGF酶学性质之间的差别。纤维素酶EGT和EGF的最适反应温度分别为45℃和55℃,纤维素酶EGF比EGT,热稳定性更好、更加耐高温;纤维素酶EGT和EGF最适反应p H均为7.0,在p H=7.0的缓冲液中,具有较好的稳定性,处理4小时仍然具有未处理酶活性的90%;Mn²⁺、Fe²⁺对两者具有激活作用,Fe²⁺的促进作用最大,Zn²⁺、Ca²⁺、K⁺、NH₄²⁺和Mn²⁺对其均具有一定的抑制作用;酶EGT的K_m=3.09 mg/m L、酶EGF的K_m=8.654 mg/m L,纤维素酶EGT结合区的部分缺失导致酶与底物羧甲基纤维素的亲和能力更强;酶EGT比酶活力为98.4 U/mg,酶EGF比酶活为53.53 U/mg。纤维素酶EGT的比酶活比酶EGF的高,催化水解能力更强。本研究通过对自然缺失部分结合区纤维素酶基因egt和合成完整的纤维素酶基因egf,进行异源表达、发酵条件优化和酶学性质比较,发现结合域的部分缺失提高了纤维素酶的比酶活,为纤维素酶应用及结合区的研究奠定基础。