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在我国小麦是仅次于水稻的第二大粮食作物,其安全生产关乎民生。近年来,小麦上的病毒病发生较重,尤其是大麦黄矮病毒(Barley yellow dwarf virus, BYDV)引起的小麦黄矮病和小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus, WYMV)引起的小麦黄花叶病,造成小麦严重减产和巨大经济损失。目前,侵染我国小麦的小麦黄矮病主要由BYDVGAV株系引起。为了了解这两种病毒病的发生、流行规律、建立早期监测和预警体系,急需建立快速、高效的病毒检测方法。以单克隆抗体为核心建立的血清学检测方法操作简单、特异性好、灵敏度高,且适合田间大规模样品检测,因此被广泛应用于植物病毒的诊断、流行规律的分析、预测预警、科学防控和抗病育种等方面。本论文分别制备了抗BYDV GAV株系和WYMV的单克隆抗体(Monoclonal antibodies, MAbs),并以单抗为核心建立了相应的血清学检测方法。(1)抗BYDV GAV单克隆抗体的制备及其检测应用：用提纯的BYDV GAV病毒粒子免疫BALB/c小鼠,经细胞融合、筛选、克隆获得8株能稳定传代并分泌抗BYDV GAV单克隆抗体的杂交瘤细胞株(18A1、18A9、12A11、7H11、1G7、1F1、27E11和3F11)。8株杂交瘤细胞分泌的腹水单抗的间接ELISA效价均达到10-6以上,抗体类型及亚类均为IgG1、kappa链。8株单抗具有特异性好、灵敏度高的特点。以制备的单抗为核心建立了特异性检测BYDV GAV的Antigen-coated plate enzyme-linked immunosorbent assay (ACP-ELISA)和dot enzyme-linked immunosorbent assay (dot-ELISA)两种血清学方法。建立的血清学方法检测感染BYDV GAV的小麦组织呈特异性阳性反应,而检测感染其他病毒的小麦和健康小麦组织呈阴性反应。用dot-ELISA方法检测携带BYDV GAV的麦蚜呈特异性阳性反应,而检测携带其他病毒的麦蚜和健康麦蚜呈阴性反应。灵敏度分析表明:ACP-ELISA和dot-ELISA检测小麦病叶的灵敏度分别达到1：81,920和1:5,120(w/v, g/mL)。利用ACP-ELISA和dot-ELISA两种血清学方法对陕西韩城采集的106株小麦样品进行检测,结果表明106株小麦样品中有64株为BYDV GAV感病样品,说明小麦黄矮病在陕西韩城发生流行。利用dot-ELISA血清学方法对田间采集的280头麦蚜进行检测,结果表明其中有24头蚜虫携带BYDV GAV。(2)抗WYMV单克隆抗体的制备及其检测应用：以提纯的WYMV的病毒粒子为抗原免疫BALB/c小鼠,用杂交瘤技术共筛选到3株能稳定传代并分泌抗WYMV单克隆抗体的杂交瘤细胞株4E11、21D4和25B1。3株杂交瘤细胞分泌的单抗腹水的间接ELISA效价均达到10-6以上,抗体类型及亚类均为IgG1、kappa链。Western blot分析表明,4E11和21D4均能与WYMV的外壳蛋白亚基有特异性反应。以制备的单抗为核心建立了检测田间小麦样品中WYMV的ACP-ELISA和dot-ELISA方法。建立的ACP-ELISA和dot-ELISA两种方法检测感染WYMV的小麦病叶组织呈特异性阳性反应,而检测感染其他病毒的小麦和健康小麦组织呈阴性反应。ACP-ELISA和dot-ELISA方法检测感染WYMV的小麦植物组织的灵敏度分别达到1：40,960和1：2,560(w/v,g/mL)。利用ACP-ELISA和dot-ELISA两种血清学方法对山东济宁采集的90株小麦样品进行检测,结果表明90株小麦样品中有39株为WYMV感病样品,说明小麦黄花叶病在山东济宁发生流行。