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黄曲霉毒素B1常会污染植物和动物源性食品,被动物摄入体内后,还可转化成毒性也较大的黄曲霉毒素M1等衍生物。黄曲霉毒素B1具有致癌、致畸、致突变作用,对人类健康构成巨大的威胁。加强对黄曲霉毒素B1的检测,对确保食品安全具有重要意义。黄曲霉毒素B1的检测方法主要有薄层层析法、高效液相色谱法及免疫学方法等。薄层层析法灵敏度不高,特异性不强,易被其它荧光物质干扰,且分析时间较长;高效液相色谱法虽然灵敏度高,但检测仪器化程度高、设备昂贵,操作技术要求高,前处理净化要求高;免疫学方法由于其特异性强、灵敏度高,前处理简单,操作简便,比较容易推广使用。酶联免疫吸附法可同时检测多个样品,特异性强、灵敏度高、速度快,是一个准确性、安全性高,实用性强的检测技术。玉米是我国较为常用的动物饲料来源,因玉米发霉导致动物黄曲霉毒素急、慢性中毒的病例屡见不鲜。本研究运用化学合成方法制备AFB1完全抗原,采用单克隆抗体技术制备灵敏度高、特异性强、效价高的抗体,建立了ELISA测定方法。采集玉米样品,进行加标回收试验,优化玉米样品中AFB1的提取净化方法,最终建立稳定、可靠的检测玉米中AFB1的方法。用AFB1与羧甲基羟胺半盐酸盐在吡啶中反应生成AFB1O,再用活性酯法将AFB1O与蛋白质偶联合成完全抗原。用TLC法对AFB1O的转化进程进行实时监测,用紫外扫描法鉴定每步反应的合成效果,并根据扫描结果计算载体蛋白与毒素的结合比。经改进的方法合成过程更为简单,同时AFB1的肟化率和AFB1O的利用率较高,分别达到84.3%和55.4%。用AFB1-HSA免疫Balb/C小鼠,四免后阳性血清效价在1﹕100,000以上。经单克隆抗体技术筛选,获得8株可持续分泌针对AFB1抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1-5G4、2-6A8、2-A5、2-B1、2-B3、2-B5、2-B6和2-D3。稳定性试验表明,经体外连续传代培养30代和在液氮中冻存180d复苏后,培养上清中抗体的效价基本保持不变。用1-5G4、2-6A8、2-A5、2-B6和2-D3五株细胞制备得5种腹水,效价全部在1﹕1,000,000以上。用1-5G4和2-6A8两株单抗建立了间接竞争ELISA的检测方法。包被抗原AFB1-BSA和腹水抗体的工作浓度分别为1﹕8,000和1﹕100,000,用2%OVA,37℃下封闭2h。使用1-5G4腹水检测时,AFB1浓度在0.1～5ng/ml时,标准曲线线性良好,线性方程为y =-0.7506x + 0.6456(r=-0.9960),IC50为1.09ng/ml,LOD低于0.1ng/ml,LOQ为0.2ng/ml。使用2-6A8腹水检测时,AFB1浓度在0.5～50ng/ml时,标准曲线线性良好,线性方程为y =-0.3998x + 0.739(r=-0.9937),IC50为5.83ng/ml,LOD低于0.5ng/ml,LOQ为0.55ng/ml。对玉米样品中的AFB1提取方法进行了优化,使提取液对ELISA检测的干扰降低,当提取液作4倍以上稀释时,基质干扰基本消失。用1,5,20,100ng/ml AFB1做加标回收试验,经检测AFB1回收率在83.7%～127%之间,平行样品之间的重复性较好。ELISA标准曲线的线性方程为y=-0.7929x+0.6692(r=-0.9952),线性范围为0.2～10ng/ml,其LOD为0.2μg/kg。