基于ARTP诱变与MMC结合选育L-组氨酸产生菌株

来源 :华南理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:bbanb
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
L-组氨酸是含有咪唑基团的重要功能性氨基酸,因其具有免疫调节、抗氧化和抗炎等多种生理功能,被广泛用于食品,饲料,医药等行业。但由于L-组氨酸的生物合成途径较长、调控机制复杂,仅通过系统性代谢工程从头改造菌株难度大且短时间内L-组氨酸产量提高并不明显。选育氨基酸结构类似物抗性突变株获得氨基酸产生菌株,仍然是目前氨基酸发酵常规育种的有效方法。然而筛选L-组氨酸产生菌株的工作量大,本研究旨在提高L-组氨酸产生突变菌株的筛选效率。具体研究内容及结果如下:(1)通过ARTP诱变处理野生型谷氨酸棒杆菌ATCC 14067,确定了菌株最佳处理时间为210 s,致死率为93.26%。然后通过全自动高通量微生物液滴培养系统(MMC)结合平板选育组氨酸结构类似物的抗性突变株。使用48孔板发酵初筛及摇瓶发酵复筛,最终从耐受两种组氨酸结构类似3-氨基-1,2,4-三氮唑10 g/L和D-组氨酸8 g/L的抗性突变株中筛选到菌株Cg-F4,该菌株L-组氨酸积累量可达0.561±0.016 g/L,并且传代7次之后,该菌株的L-组氨酸产量可稳定在0.55 g/L左右。(2)为进一步提高L-组氨酸产生菌株的筛选效率,建立了基于L-组氨酸稀有密码子标记与液滴微流控设备相结合的筛选方法。首先通过将两种荧光报告基因egfp和m Cherry序列中编码L-组氨酸的常用密码子CAC全部替换成稀有密码子CAT,发现替换之后的报告基因egfp-RC9和m Cherry-RC6表达水平都显著低于原始基因。并且由于egfp报告基因在L-组氨酸稀有密码子替换数量上的优势。选择egfp-RC9与egfp进行了L-组氨酸回补实验,发现随着L-组氨酸浓度的增加,携带egfp标记的细胞荧光强度没有显著变化,然而携带egfp-RC9标记的细胞荧光强度有显著提高,表明带有egfp-RC9的表达对L-组氨酸的浓度有依赖性,初步验证了egfp-RC9筛选标记的可行性。因此将egfp-RC9标记筛选物导入含有多重结构类似物抗性表型的突变株中,通过MMC将带有标记筛选物的突变菌株生成若干液滴,同时在线观察各个液滴间的荧光变化情况。随着培养时间的增加,各个液滴间的荧光增加速率差异逐渐显现。根据荧光增加速率差异提取液滴摇瓶发酵检测L-组氨酸含量。最后将对应液滴的荧光增加速率与所测得的L-组氨酸浓度进行拟合,确定了液滴的荧光增加速率与胞外L-组氨酸浓度的相关性(r=0.9101;R~2=0.7853),同时筛选到菌株Cg-DL,该菌株产L-组氨酸量为1.299±0.083 g/L。本论文通过将ARTP诱变与MMC结合选育结构类似物抗性突变株,并且建立了基于L-组氨酸稀有密码子标记与液滴微流控设备相结合的筛选方法,提高了抗性突变株的筛选效率,最终获得了具有稳定表现的L-组氨酸产生菌,可为其他氨基酸或者其他代谢产物的产生菌株筛选提供良好的借鉴。
其他文献
软件缺陷预测技术可以预测出软件系统中存在缺陷的可能性较高的软件模块,从而帮助开发和测试人员优化测试资源分配以在有限的时间和资源条件下尽可能多地发现和修复软件缺陷。然而,在实际的场景中,某些软件项目本身的缺陷数据不足,难以构建有效的缺陷预测模型;而直接使用其他软件项目的缺陷数据训练得到的模型,也通常无法获得令人满意的预测性能。因此,利用其他软件项目的缺陷数据为目标软件项目构建有效的缺陷预测模型,即跨
液滴撞击现象广泛见于自然界及工业应用中,减少撞击过程中液滴在壁面上的停留时间在防结冰、自清洁和防腐蚀等应用中至关重要,并且目前对于液滴撞击加热壁面的膜态沸腾阶段的
肿瘤是人类健康的重大威胁之一。AGR2是一种二硫键异构酶,在多种肿瘤中超量表达,并与肿瘤的生长、转移和耐药性有着密切的关系,因此,AGR2是潜在的抗肿瘤治疗靶标。虽然针对AG
本文对主观投资和量化交易的两大类型的投资方式给予关注,通过详细的事实和相关的论证分析,解析我国目前对冲基金市场中的投资类型、投资业绩分析、投资风格形成、投资业绩评
学位
AGV(Automated Guided Vehicle),又称作能够自主寻径的智能车,主要应用于物联网场景中,并配备引导设备,能够自主运行至工位以满足生产需求。实质上,这种业务模式有利于生产更
二十世纪下半叶陆续提出了一些智力测试问题的计算模型,到二十一世纪初,由于人工智能IQ测试有助于在心理测量学,认知科学和人工智能之间建立新的桥梁,因此引起广大研究者的关
随着社会经济的快速发展,机动车拥有量迅速增加,城市交通拥堵等问题也变得日益严重。为了解决交通拥堵问题,交通部门广泛应用智能交通系统进行交通管理。短时交通流预测不仅是智能交通系统的核心内容之一,也是交通部门实施交通控制和交通诱导的基本依据。如何对短时交通流进行准确预测一直是各国学者研究的热点问题。短时交通流具有随机性、周期性、相关性和非线性等特征,是一种典型的时间序列数据,准确的提取交通流的时序特征
TiAlSiN涂层硬质合金刀具具有高的硬度、耐磨性以及抗高温氧化性等性能,在汽车零部件、精密模具等机械加工方面具有广泛应用。石墨烯具有强度高、结构稳定、高柔韧性和高导热率等优异性能,是提高复合材料性能的理想材料。目前,国内外对石墨烯掺杂TiAlSiN涂层硬质合金刀具的研究较少,本文基于第一性原理,从微观原子尺度上研究石墨烯掺杂TiAlSiN涂层WC-Co硬质合金刀具的界面结合性能,本文对揭示界面结
贴片机是整个贴装生产线的重要组成设备,其性能的好坏直接决定着贴装的质量,而控制系统又是其最核心的部分。本文以面向中小型企业,以拱架式贴片机作为控制对象,结合其具体的机械结构和贴装工艺要求,以降低设备成本、提高系统运行的平稳性为出发点,构建了一种以ARM+FPGA为核心的贴片机控制系统。在控制系统中,ARM端负责以逻辑控制为主的任务调度与分配,FPGA端负责多轴位置控制和图像处理等以大量快速数据处理