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本研究主要探讨胎牛性别和不同季节对水牛胎儿骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖的影响以及TGF-β1在维持水牛胎儿BMSCs细胞间质特性中的作用，并对分离得到的BMSCs进行细胞生物学鉴定;此外，探讨了水牛胎儿BMSCs用于核移植供体细胞重构胚的发育情况，以便为进一步完善水牛胎儿BMSCs的体外分离培养体系及为水牛核移植供体细胞的选择提供一定的科学依据。 首先比较了来自不同胎牛性别和不同季节的水牛BMSCs生长特性。结果发现，不同性别胎牛和季节分离得到的水牛胎儿原代BMSCs都具有典型的间充质干细胞形态。来自不同胎牛性别水牛胎儿BMSCs的培养效果差别不大。然而，在春、夏、秋三季分离的BMSCs，其生长速度优于冬季分离的BMSCs，形成的细胞集落数均显著高于冬季的BMSCs(59.33±2.62，P＜0.05)但春、夏、秋三季的三组间无显著差异(71.33±1.25 vs69.67±3.09 vs73.33±1.24，P＞0.05)。RT-PCR检测发现，分离得到的胎牛BMSCs表达CD73、CD105、Oct4等mRNA;细胞免疫荧光发现，表达Oct4、Sox2、Nanog;流式细胞术发现，表达表面抗原CD44、CD29。诱导分化实验证明p3代BMSCs可以被诱导向成脂细胞、成骨细胞和成软骨细胞分化。 其次，探讨了TGF-β1对水牛胎儿BMSCs维持细胞间质特性的作用。结果发现，水牛胎儿BMSCs传代培养过程随代数增加，细胞增殖能力逐渐变弱、细胞形态变得不规则。qPCR检测显示，随着培养代数增加，细胞中Oct4、Sox2、Nanog的mRNA表达量降低，细胞渐渐失去多能性。当BMSCs培养至10代以后，间质相关基因N-cadherin等表达量显著下调(P＜0.05)。添加适宜浓度的TGF-β1处理细胞后，细胞生长速率明显加快，间质标记基因N-cadherin、fn1表达显著上调，上皮标记基因E-cadherin表达显著下调，而上皮间质转变(EMT)相关调节基因Snail等，以及多能性基因Sox2、Nanog表达量均显著上调(P＜0.05)。细胞粘附性试验发现，处理组细胞粘附性降低，相对更具备间质细胞特性;细胞核型分析发现，对于p10代BMSCs，TGF-β1处理组细胞核型正常率显著提高(P＜0.05)。 此外，研究了水牛胎儿BMSCs用于核移植供体细胞重构胚的发育情况。qPCR分析发现，BMSCs-NT和BFFs-NT两组囊胚Oct4 mRNA表达量无显著差异(P＞0.05)，但BMSCs-NT组囊胚Nanog和Sox2 mRNA表达量均显著高于BFFs-NT组(P＜0.05)。囊胚免疫荧光检测结果显示，Oct4在BMSCs-NT组囊胚上相对荧光强度强于BFFs-NT组，两组囊胚的Sox2荧光强度较弱，Nanog在两组囊胚的荧光表达均不明显。 上述结果表明:(1)水牛胎儿BMSCs的增殖能力受季节影响，其中春、夏、秋季更适合分离培养水牛胎儿BMSCs;(2)水牛胎儿BMSCs经适合浓度的TGF-β1处理，有利于维持间充质干细胞特性和核型稳定;(3)来自水牛胎儿BMSCs的核移植胚胎，其多能基因的表达高于来自BFFs的胚胎。