鸭疫里默氏菌（Riemerella anatipestifer,RA）是一种可以感染鸭、鹅、火鸡和其它禽类的细菌性病原体。本文对其酶活性及其在RA抵抗恶劣环境中的作用开展研究,主要内容和结果如下:1、鸭疫里默氏菌DegP的酶活性特性利用SDS-PAGE和Western blot检测到RA的DegP在RA中及在大肠杆菌工程菌中表达时均以56kDa前体蛋白和切割了N端信号肽的53kDa成熟蛋白两种形式存在;在大肠杆菌工程菌中表达N端Flag标签与C端His标签双重标记的DegP并WB检测,证明DegP可以自切割N端信号肽,改变自身分子量。纯化大肠杆菌工程菌表达的RA DegP蛋白,以β-酪蛋白为底物进行DegP的体外酶活性试验,证明大肠杆菌工程菌表达的RA DegP具有体外酶活性。以偶氮酪蛋白为底物测定RA DegP体外酶活性最佳条件,结果确认DegP的酶反应最佳条件为44°C,PH 7.0。DegP的酶活性激活不需要金属离子参与,但钙离子和镁离子可以促进DegP的酶活性,锌离子和锰离子可以抑制DegP的酶活性。构建载体并表达各酶活关键位点突变的DegP蛋白,测定酶活性,发现突变140位组氨酸、170位天冬氨酸和249位丝氨酸任一位点均使得DegP失去酶活性,可以确认以上三个位点的氨基酸共同构成DegP的活性中心,是典型的丝氨酸蛋白酶活性中心;结合DegP可以被丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF抑制,确认DegP为丝氨酸蛋白酶。2、DegP在鸭疫里默氏菌抵抗恶劣环境中的作用构建DegP缺失与酶活位点突变的RA菌株,环境胁迫试验表明,在pH 4.0条件下处理20 min、pH 10.0条件下处理20 min和2.4 mol/L NaCl条件下处理1 h时,相比于野生株,缺失株和各突变株均表现出显著的生存率降低;42°C 10 min处理后,野生株、缺失株及各突变株的生存率没有明显区别。表明DegP有利于鸭疫里默氏菌在酸性、碱性和高渗环境中的生存,且此过程中DegP的酶活性起到作用,意味着DegP可以帮助RA在一些特殊环境,如宿主的胃和肠中生存,即对RA的入侵有一定帮助。综上,鸭疫里默氏菌DegP具有酶活性,是一种丝氨酸蛋白酶;140位组氨酸、170位天冬氨酸和249位丝氨酸是其酶活关键位点;DegP可以自切割N端信号肽;DegP在鸭疫里默氏菌抵抗酸、碱和高渗环境中起到重要作用。