小鼠H2-Eb位点多态性与特异性体液免疫应答

来源 :大连医科大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:zhengrs_2009
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昆明小鼠(KM mice)在国内被广泛地用于免疫学教学与科研,但作为封闭群动物,其显而易见的个体遗传背景差异对免疫应答的结果有着不可忽视的影响。为探讨二者之间的确切关系,本试验对60只KM小鼠,采用聚合酶链反应—序列特异性引物(Polymerase Chain Reaction-Sequence Specific Primer,PCR-SSP)技术检测它们的遗传多态性,同时通过酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)测定这些小鼠对蛋白质抗原(卵白)的二次体液免疫应答水平。已有研究表明,位于小鼠的17号染色体上的H-2复合体(Histocompatibility 2 complex,H-2 complex),即主要组织相容性复合体(Major Histocompatibility Complex,MHC),是多态性最丰富的基因系统,而且在H-2,其Ⅰ区内E亚区的基因多态性高于A亚区,而E亚区的多态性又绝大部分体现在其β座位(H2-Eb)的第二个外显子上;同时,H-2复合体通过其Ⅰ区内Ⅱ类基因的编码分子向CD4~+辅助性T(Th)淋巴细胞递呈抗原肽,控制着针对蛋白质抗原的特异性体液免疫应答。因此本试验选用该位点对KM小鼠进行多态性检测并分析其与抗卵白IgG抗体水平的关系。根据已报道的Mus musculus domesticus(西欧家鼠)H2-Eb位点第二个外显子的核酸序列,本试验设计了6组序列特异性引物(分别称为MudoEb1、MudoEb4、MudoEb5、MudoEb7、MudoEb13和MudoEb17),并以小鼠肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF α)作为PCR扩增的阳性内部参照。所有PCR-SSP的内参条带全部出现,共有78例PCR检测结果阳性(MudoEb5扩增阳性的有50例,MudoEb7有28例,其余4组引物均阴性),检出了65%的等位基因(78/120),且43.3%的小鼠此位点的基因型相同(26例为MudoEb5和MudoEb7双阳性),表明KM小鼠H2-Eb第二个外显子的等位基因以MudoEb5为主,基因型以MudoEb5/MudoEb7为主。同时,两因素方差分析显示:等位基因为MudoEb7的小鼠,其抗卵白抗体水平低于不携带MudoEb7的小鼠(p<0.05),这提示KM小鼠中未被检出的等位基因,较MudoEb7更有利于高水平抗卵白IgG抗体的产生:等位基因为MudoEbs的小鼠,其抗卵白抗体水平与不携带MudoEbs者无显著性差异;而且MudoEbs和MudoEb7之间不存在交互作用。因为MHCll类分子pl区的蛋白序列差异会影响到MHCn类分子递呈抗原肤的凹槽的结构,本文对Mud。助5和MudoEb7的编码多肤进行了一、二级结构分析,并通过同源模建的方法推测出二者的空间构象,参照已知的MHCH类蛋白分子(I一甘),探讨了三者之间不同抗原肤结合袋(P1、P4、P6、P7和Pg袋)的形状和电荷的区别,推测其中P1袋可能决定抗原递呈特异性的差异而与体液免疫应答的不同结果有关;至于可能的氢键形成情况,MudoEbs和MudoEb7则可能由于保守的氨基酸残基而是类似的。
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