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目的 探讨流感嗜血杆菌呼吸道定植通过TLR4-MyD88信号通路引起哮喘小鼠Treg/TH17的失衡表达,导致哮喘的慢性气道炎症、气道重塑的机制。方法1、制作哮喘合并呼吸道流感嗜血杆菌定植C57BL/6小鼠模型,在注菌后第7、21天处理动物;通过HE染色观察气道病理改变;留取气管行细菌培养,评估小鼠呼吸道细菌定植情况,并和TLR4基因敲除小鼠作比较。2、流式检测脾脏组织CD4+T淋巴细胞中TH17、Treg与TLR4细胞的数量及TH17/Treg比值;Real-Time PCR测定各组肺组织IL-17、IL-10及Foxp3 mRNA表达;ELISA检测血清中IL-10、IL-17的蛋白表达以及IL-10/IL-17。3、测定BALF中的细胞总数,分析各组气道形态学参数,检测血清中TNF-a的表达,观察小鼠气道重塑、气道炎症变化;测定肺组织细胞中MyD88和NF-kB的表达,探讨信号通路。结果1、成功建立哮喘合并流感嗜血杆菌呼吸道定植模型。2、与C57BL/6野生型小鼠相比,C57BL/6 TLR4-/-组哮喘合并流感嗜血杆菌后的TH17、TH17/Treg、IL-17/IL-10、IL-17mRNA均明显降低;Treg、IL-10、IL-10mRNA和Foxp3 mRNA在哮喘合并流感嗜血杆菌组第21天增加。3.与C57BL/6野生型小鼠相比,C57BL/6 TLR4-/-小鼠哮喘合并流感嗜血杆菌后,气道Wat/Pbm值、Wam/Pbm值,血清中TNF-a的表达以及BALF中细胞总数均降低。结论1、成功建立了流感嗜血杆菌定植哮喘小鼠呼吸道的模型,为随后的实验研究提供了一个很好的基础。2、C57BL/6TLR4-/-组的小鼠呼吸道存在流感嗜血杆菌定植时,各组气道TH17/Treg低于C57BL/6野生型小鼠,提示气道定植细菌可能通过TLR4加重哮喘的免疫失衡。3、C57BL/6 TLR4-/-组的小鼠呼吸道存在流感嗜血杆菌定植时,各组气道炎症反应和气道重塑明显低于C57BL/6野生型小鼠,提示TLR4在哮喘气道重塑和气道炎症中有重要作用。4、流感嗜血杆菌可能通过上调气道细胞TLR4-MyD88通路,促进转录因子NF-kB的表达,加重哮喘的气道炎症。