黑果枸杞的真伪鉴别及质量研究

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茄科植物黑果枸杞(Lycium rwthenicum Murray)的成熟果实在我国的传统民族医药中占有非常重要的地位。根据藏医学经典《晶珠本草》中的详细记载:黑果枸杞味甘,性平,清心热,对心脏发热,心脏疾病,月经不调,更年期等疾病的治疗具有很显著的疗效。黑果枸杞果实富含花青素类天然色素、甜菜碱等成分,现代药理学证明黑果枸杞的生理活性与该类成分有关。近年来黑果枸杞和白刺的疗效均受到了广泛的关注,由于黑果枸杞和白刺这两种浆果的果实外形很相似,单用肉眼看是难以区别的,现中药材市场中白刺为黑果枸杞主要伪品。本实验通过分子鉴定学手段将其进行区分,再根据黑枸杞的ITS序列构建系统发育树,根据黑枸杞序列形成的不同类群分析黑枸杞的品质差异。再通过对黑果枸杞中花青素及甜菜碱为黑果枸杞建立质量控制标准提供实验依据,并与白刺及红枸杞进行比较。本论文对收集于全国主要产区(新疆喀什、莎车县、阿勒泰、精河县、青海格尔木、诺木洪等地区)的11批黑果枸杞通过几种方法对黑果枸杞及其伪品做了真伪鉴别,并对所有批次的黑果枸杞中花青素类成份做了含量测定及化学成分定性研究,以下是本文实验的主要内容:第一章利用分子鉴定学方法根据黑果枸杞的ITS序列构建系统发育树,再根据黑枸杞序列形成的不同类群分析黑枸杞的品质差异,并从分子生物学角度鉴别各不同产地黑果枸杞的真伪。通过对比小檗科小檗、白刺、黑果枸杞的ITS序列对比,三者在碱基长度有明显的区别。通过ITS序列的检测可以很好的区分小檗科小檗、白刺、黑果枸杞第二章1使用反相高效液相色谱法对黑果枸杞与白刺中的花青素进行了含量测定,确定了花青素成分的反相高效液相色谱法对黑果枸杞和白刺的最佳提取工艺,并且对提取条件进行了优化。本研究共检测出13个峰,经光谱扫描最大吸收波长都为525nm,初步确定为花青素类成分。色谱条件C18ODS80Ts QA(150×4.9mm,7um i.d, Tosoh, Tokyo, Japan),保护柱为:Kromasil C18柱(12×6.6mm,5um)。流动相:A:乙腈(15%甲醇);B:甲酸溶液10%甲酸溶液(0.1%三氟乙酸);梯度洗脱:0-8min-30-min-35min-40min-45min(3%A-8%A-20%A-25%A-3%A-3%A);检测波长:525nm;流速是1.Oml/min;进样量为10ul;DAD检测器的扫描波长为200-800nm,温度30℃。2利用质谱技术对所分离得到的花青素进鉴定用LC-MS质谱系统将第1批次的黑果枸杞测量样品的LC/MSD离子阱数据进行分析并计算分子量,对测量样品进行分离。初步鉴定了黑果枸杞中1种含量最高的花青素第三章采用HPLC-ELSD对黑果枸杞与普通红枸杞甜菜碱成分来确定的色谱条件的内容进行了优化,以确定最佳的色谱条件,并分析黑果枸杞与普通红枸杞甜菜碱之间的差异。经检验,黑果构杞与普通红枸杞二者甜菜碱含量没有明显差异。色谱条件Hypersil NH2色谱柱:(250mm*4.2mm,5μm);流动相:四氢吠喃-甲醇-3%三氟乙酸(61:30:9),流速为1.0mL/min;漂移管温度是90℃;柱温是22℃;进样量:10μ。
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