目的:乙型肝炎病毒感染慢加急性肝衰竭(HBV-associated acute-on-chronic liver failure,HBV-ACLF)病情危重、发展迅速、病死率高达70～80%,是传染病死亡的重要疾病之一。其发病机制不是十分明确。目前研究多集中于“免疫正性调控”的研究,对于负性调节分子在HBV-ACLF中的表达情况未见相关报道。本文研究了HBV-ACLF过程中患者体内T细胞亚群上免疫共刺激负性调控分子——程序性死亡分子(Programmed death-1,PD-1)及其配体PD-L1的表达变化以及与病情预后之间的关系,试图阐明HBV-ACLF过程中PD-1/PD-L1表达对病情的变化影响。方法:选择60例HBV-ACLF患者、15例肝炎肝硬化乙型活动性患者及15例健康人为研究对象(实验选择的病例ALT或AST均大于正常值的两倍)。临床数据的收集:实时定量PCR检测患者的HBVDNA,收集临床检验数据:血常规、肝功、凝血酶原活动度等指标;根据入组时病情分为早、中、晚三期,根据疾病不同转归分为好转、无效、死亡。应用流式细胞仪检测外周血CD8~+T细胞上相关分子:1)T淋巴细胞上的PD-1、CD28、CD95、CD45RA、CCR7;2)CD14~+细胞上的PD-L1;3)CD8~+细胞上的穿孔素、颗粒酶A、颗粒酶B、CD107a。应用CBA(CytometricBead Array)试剂盒动态检测外周血细胞因子,包括白介素-2(interleukin-2,IL-2)、IL-4、IL-6、IL-10,肿瘤坏死因子-α(tumour necrosis factor-α,TNF-α)、干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)等。取10例HBV-ACLF患者的肝脏行免疫组化染色分析,另各取10例肝炎肝硬化患者、6例健康人作为对照组。了解ACLF、肝炎肝硬化患者肝脏上CD4~+T细胞、CD8~+T细胞、PD-1及其配体PD-L1的表达情况。结果:HBV-ACLF患者CD8~+T细胞上PD-1表达上调(17.31%±11.28%),较肝硬化患者(11.18%±5.38%)和健康人(5.96%±4.19%)显著增高;根据Meld评分分组,Meld≥20分组患者PD-1阳性表达率(20.98%±12.28%)比＜20分组患者(13.61%±8.23%)明显增高,组间具有显著性差异(P＜0.05);好转组PD-1表达率(12.89%±7.18%)低于无效组(21.19%±11.21%),组间具有显著性差异(P＜0.05);早期(13.27%±7.2%)、中期(18.86%±10.31%)、晚晚(29.51%±19.59%)三期PD-1表达率呈上升趋势,组间均有显著性差异(P＜0.05)。CD14~+T细胞上PD-L1在疾病早期表达低,随着病情的加重表达成上升趋势,早期(4.19%±3.51%)分别与中期(9.24%±6.92%)、晚期(7.05%±5.34%)有显著性差异(P＜0.05);好转组与死亡组有显著性差异(P＜0.05)。CD8~+T细胞上CD95在死亡组表达高于好转组与无效组,但无显著性差异。代表CD8~+T细胞杀伤能力的穿孔素、颗粒酶及CD107a在死亡组表达升高,与其它组间有显著性差异(P＜0.05),但穿孔素、颗粒酶及CD107a阳性细胞上PD-1阳性表达率非常低。随着病情的加重致炎因子IFN-γ、TNF-α表达增多,可能促进了PD-1的上调表达。抑炎因子IL-10无明显变化。此外,HBV-ACLF和肝硬化者在肝组织汇管区及炎症区PD-1表达增强,肝细胞上PD-L1表达上调。结论:PD-1在HBV-ACLF中外周血CD8~+T细胞上表达上调,且与病情严重程度成正比。HBV-ACLF汇管区及炎症区PD-1及肝细胞上PD-L1表达上调;PD-1/PD-L1的升高可能与免疫功能紊乱、病情加重有关。HBV-ACLF过程中效应性CD8~+T细胞上PD-1表达率较其它CD8~+T细胞低,PD-1对该类细胞的功能抑制及促凋亡作用减弱,可能与病情的加重有关。