随着生活水平的不断提高,人们对奶制品的需求越来越多,对牛奶品质的要求越来越高。奶牛乳房炎是困扰奶牛养殖业最严重的疾病之一。近年来,南通地区奶牛养殖业健康发展,但行业竞争也不断加剧,对乳房炎的流行病学及防控措施研究显得尤为迫切。本研究从南通市各个县区的6家奶牛场中采集牛奶样品,进行病原菌的分离鉴定,开展流行病学调查,并对主要致病的葡萄球菌和链球菌开展耐药性分析,为防控奶牛乳房炎.提供合理建议。一、南通地区奶牛乳房炎的流行病原调查为了了解南通地区奶牛乳房炎发病情况,分析病因,本研究在南通地区部分奶牛场采集了 CMT检测阳性的282份奶样,其中有163份奶样检出细菌,利用传统的分离方法分离出175株,其中葡萄球菌102株,检出率为36.17%;链球菌56株,检出率为19.86%;杆菌17株,检出率为6.02%。本研究结果表明南通地区奶牛乳房炎病原主要是葡萄球菌、链球菌和少数杆菌。二、南通地区奶牛乳房炎葡萄球菌和链球菌分离株耐药性分析为了能对南通地区奶牛乳房炎有效用药,我们采用纸片法针对其中主要的分离菌葡萄球菌和链球菌进行药物敏感性分析。根据CLSI 2017的建议,使用纸片扩散法检测了其对20种不同抗生素的耐药能力。本试验中102株葡萄球菌对青霉素G的耐药性最高,达到了61.76%,这可能与临床治疗乳腺炎时大规模经常使用该药物有关。此外,葡萄球菌对多粘菌素B（50%）、四环素（41.18%）、头孢他啶（38.24%）、大观霉素（35.29%）,也产生了较高的耐药性。本研究中统计链球菌分离株抗生素高敏率,结果显示:头孢曲松、头孢他啶的高敏率分别为91%、87.5%,万古霉素、红霉素、克拉霉素、磷霉素和克林霉素的高敏率分别为84%、82%、73%、93%、82%,苯唑西林和呋喃妥因的高敏率分别为84%和82%,左氟沙星的高敏率为82%。这一系列药敏试验结果可见南通地区奶牛乳房炎治疗中产生了很强的抗生素耐药性,对今后抗生素使用,要改进用药方法,防止耐药趋势的进一步恶化。三、耐药基因tetK、tetM实时荧光定量PCR检测方法的建立及检测应用为了 了解日益严重的四环素耐药原因,本论文针对四环素耐药基因tetK、tetM建立了荧光定量PCR检测方法。首先我们参照GenBank中这两个基因的序列,设计了两对引物,同时截取其中约115 bp片段由IDT公司全基因合成并克隆进载体作为对照。结果显示,本研究建立的方法操作方便,检测快速;分别特异性扩增2种耐药基因tetK、tetM,与细菌其它主要基因均无交叉反应,特异性较强。本研究建立的细菌2种耐药基因tetK、tetM的荧光定量PCR方法为快速发现临床动植物产品中携带或污染的耐药细菌,对临床样品中tetK和tetM核酸的检测及流行病学调查提供了一种快速、特异、敏感的技术手段。将该方法应用于论文研究中分离的102株葡萄球菌和56株链球菌tetK、tetM检测,结果显示共有50株细菌检测到携带有这两种耐药基因中的一种或两种,两种耐药基因携带率达到了31.6%。本研究结果表明南通地区日益严重的四环素抗性菌株的出现可能与相关耐药基因有关。