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核酸检测涵盖了基因筛选,疾病诊断,生物医学研究等诸多领域,与社会稳定和人类健康有着密切的联系。如何克服传统的核酸检测方法操作复杂、费时费力、灵敏度低等缺陷,发展完善高灵敏、高精确、快速简便的研究和分析方法是多年来研究者们研究的热点问题,为满足各个领域对于核酸高灵敏的放大检测的迫切需求,生物信号分子放大的检测技术应运而生,它结合各种工具酶借助于一些特殊材料,并结合电化学、光学等技术实现对目标物直接或间接的高灵敏放大检测。本论文基于核酸分子的识别作用和信号放大技术发展了三种不同的信号放大策略,应用于核酸的放大检测。主要包括:1.基于辣根过氧化物酶和金纳米颗粒信号放大检测DNA以辣根过氧化物酶的催化反应为信号放大手段,发展了一种基于三明治杂交结构的通过金纳米颗粒的团聚或分散状态实现DNA信号放大检测的新方法。当存在目标DNA时,靶标链和结合了辣根过氧化物酶的探针链通过杂交作用被捕获探针固定于链霉亲和素化的琼脂糖微球上,辣根过氧化物酶将过氧化氢分解,体系中就会生成团聚的金纳米颗粒。该方法对核酸的检测下限为10nmol/L,是一种有效地将酶促反应与纳米材料结合起来的核酸信号放大检测方法。2.基于免标记发夹型探针和核酸外切酶Ⅲ荧光信号放大检测DNA设计合成一种长臂发夹型核酸探针,结合核酸外切酶Ⅲ水解反应建立了种新的免标记荧光信号放大检测DNA的新方法。当没有靶DNA存在时,SYBRGreen I荧光染料能够嵌入发夹型探针的茎部而发出很强的荧光,而当靶DNA存在并和发夹型探针杂交后,核酸外切酶Ⅲ从杂交产物的3’端开始水解发夹型探针,释放出靶DNA,并触发下一个酶水解反应,同时SYBR Green I染料被释放,导致荧光信号降低,从而实现了对DNA的高灵敏检测。该方法的检测限低至320fmol/L,比传统双标的分子信标的检测方法降低了4~5个数量级,且该方法还具有免标记、简单、快速的特点3.基于核酸外切酶Ⅲ的酶切放大检测SNP利用一种标记FAM荧光基团的短片段的核酸探针,结合核酸外切酶Ⅲ的特异性切割双链3’端的性质,发展了一种循环放大检测SNP的简单方法。当存在与信号探针完全互补的DNA时,信号探针与DNA互补杂交形成稳定的双链,诱导核酸外切酶Ⅲ将信号探针水解释放出FAM荧光基团,释放的靶标进行下一轮循环;当存在与信号探针有一个碱基不互补的DNA时,不能诱导核酸外切酶Ⅲ发生酶切作用,信号探针的荧光会被与其杂交的标记有淬灭基团的探针所淬灭。该方法具有很好的检测效果,其检测下限为137pmol/L,为SNP的检测提供一种新的思路。