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目的：探讨兔滑膜间充质干细胞（SMSCs）在体外分离培养、扩增及鉴定的可行性，并建立GFP和SPIO双标记技术，为解决SMSCs作为软骨损伤修复的种子细胞在关节腔内的示踪问题打下基础。方法：兔子麻醉后，取膝关节髌上囊内侧的滑膜组织，消化分离出滑膜细胞后培养并纯化，进行体外扩增传代培养，镜下观察细胞的形态、结构特点，采用流式细胞仪进行表型鉴定，采用成软骨诱导液定向诱导为软骨，Alcian Blue、番红O和甲苯胺蓝染色检测诱导结果，以观察滑膜干细胞作为修复兔膝关节软骨损伤种子细胞的可行性；慢病毒载体介导的GFP基因标记SMSCs，将GFP标记成功的SMSCs再作SPIO标记，在荧光显微镜下观察GFP标记结果，普鲁士蓝染色及投射电镜下观察SPIO标记结果，并对双标记后SMSCs进行细胞活性和增殖能力检测。结果：兔原代滑膜细胞在镜下呈长梭形或椭圆形，传代后或纯化后基本上成长梭形，通过纯化能获得单细胞克隆干细胞系；SMSCs贴壁生长，细胞增殖十分活跃，3~4天即可传代一次，生长曲线呈S状，接种后2小时可贴壁，细胞呈螺旋状、网状或辐射状生长，流式检测细胞表型发现CD44、CD90分子表达阳性，CD34、CD45分子表达阴性；成软骨诱导14天后Alcian Blue染色可蓝色软骨团,经番红O染色可见SMSCs被染成红色，呈现出软骨细胞的特征;甲苯胺蓝染色显示具备软骨细胞特异的分泌特性；GFP标记后SMSCs在荧光显微镜下可见绿色荧光，并随MOI的增大表达逐渐增强，SPIO标记后经普鲁士蓝染色显示细胞的胞质内见蓝染铁颗粒，并随标记浓度的增加细胞内蓝染颗粒增多且颜色加深，且双标后的SMSCs的细胞活性及增值能力与标记前无明显差别。结论：兔SMSCs在体外分离培养及鉴定是完全可行的，具有成软骨诱导分化的潜力；慢病毒介导的GFP基因能高效感染SMSCs并稳定表达，SPIO可以有效的进行活细胞标记，两种标记均不影响细胞的基本生物学特性，为后期干细胞在关节内的示踪奠定了基础。