目的:介入热疗成为治疗肝细胞癌的新方法,但血管细胞受到的损伤需要评估。原代内皮细胞相比以往研究的细胞系可以保留更多的蛋白结构和功能。因此提取原代内皮细胞进行体外实验,研究不同温度下的形态和活性变化及死亡模式,认识内皮细胞对热疗的耐受性规律,并以此为依据对介入热化疗的临床策略提出建议。去细胞技术可以保留组织内部完整的血管结构,可以用于建立体外热疗模型用以后续评估热疗对内皮细胞的影响。方法:用组织贴壁法分离培养内皮细胞,在41℃、43℃、45℃三个温度梯度下水浴研究原代内皮细胞的形态变化,并用荧光探针检测线粒体和细胞核的变化。用MTT法定量地检测不同温度和加热时间的内皮细胞活性,用流式细胞术定量检测细胞存活率和凋亡水平。用去细胞肝脏作为生物支架建立体外热疗模型。结果:41℃加热30min的温热刺激下原代内皮细胞不发生明显形态变化,43℃时会引起原代内皮细胞的发生体积皱缩、形态变圆、细胞间连接消失、线粒体致密聚集的现象。检测活性发现形态变化与细胞活性的下降对应,死细胞的绝对比例增多。延长热疗时间至1h细胞活性进一步下降,并且45℃加热后原代内皮细胞的活性再24h内持续下降,失去增殖能力。在热疗刚结束时,细胞坏死比例随温度上升而提高。体外构建的去细胞肝脏模型具有完整的血管结构,内皮细胞聚集在血管周围生长。结论:温度在温热治疗损伤中起决定作用,低于临界温度时几乎不影响细胞的形态和活性,高于临界温度后,随温度上升损伤程度加深。延长加热时间也会增加损伤效果。45℃时原代内皮细胞发生不可逆的损伤,且温热处理刚结束时细胞损伤以坏死为主。内皮化的去细胞肝脏模型相比二维培养有望成为更好的介入热化疗的体外模型。