本文研究了不同程度热应激对小鼠肝脏结构,氧化指标及肝功能生化指标的影响,探讨了不同热应激环境下小鼠肝脏细胞凋亡及HSP32基因的表达情况。并通过腹腔注射血晶素(hemin)以及锡原卟啉(tin-protoporphyrin, SnPP)分别诱导和抑制HSP32表达,旨在揭示HSP32对热应激状态下肝组织的保护作用及HSP32系统的具体作用机制,为今后研究提供重要线索。1.HSP32与热应激导致的小鼠肝损伤之间相关性的研究本实验研究的目的是在长期慢性热应激下,探讨HSP32与热应激导致的小鼠肝损伤之间的相关性。将48只3周龄小鼠随机分成对照组和热应激组。在热应激1周、3周、6周后分别处死小鼠。称体重及对应肝脏重量,测定肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)浓度,检测血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活力；HE切片观察肝组织病理学变化；提取肝组织总RNA,实时荧光定量测定肝组织HSP32mRNA及caspase-3mRNA的表达,吸光度法检测caspase-3活性,ELISA检测HSP32蛋白表达,免疫组化检测HSP32蛋白定位。实验结果表明在热处理的前3周,血清中AST、ALT水平以及肝组织MDA浓度均明显升高,SOD活性下降；小鼠肝组织中caspase-3mRNA表达及活性均显著增加,同时组织病理学观察结果也显示,肝脏在热处理前3周时的损伤最为明显；而在热处理的第6周,肝组织无明显病理学变化,而且抗氧化指标、肝功能生化指标及肝细胞凋亡检测指标与对照组无明显差异；在整个热应激阶段HSP32 mRNA表达均显著高于对照组,同时免疫组化结果也显示HSP32在所有热应激小鼠肝组织中均有阳性表达。以上实验结果表明,肝组织在不同热应激时间状态下所呈现的病理损伤程度不同,以热处理3周时的损伤最为明显,长期慢性的热应激会引起机体对抗热应激有害影响的适应性改变,从而出现一定程度的恢复；整个热应激期间,HSP32的表达显著高于正常对照组,提示其与与热应激导致的小鼠肝损伤之间有明显的相关性。2.HSP32基因在热应激小鼠肝组织中的表达及其作用机制的研究热应激环境会引起动物机体一系列热休克蛋白的表达。其中HSP32作为一种热休克蛋白在许多器官中发挥细胞保护作用。由实验一结果我们得知HSP32与热应激导致的小鼠肝损伤之间有明显的相关性。因此,为确定HSP32对热应激肝损伤的保护作用及作用机制,本次研究拟以热休克诱导的小鼠急性肝损伤为模型,通过腹腔注射血晶素(hemin)以及锡原卟啉(tin-protoporphyrin, SnPP)分别诱导和抑制HSP32表达,并结合肝功能、氧化应激、caspase-3 mRNA及蛋白表达测定以及组织病理学检测等技术,观察其对肝损伤的保护作用,并深入探讨HSP32系统的具体作用机制。实验结果表明急性热处理导致了小鼠急性肝损伤,并发生了氧化应激和细胞凋亡的现象。小鼠预先给予hemin能有效诱导肝组织中HSP32 mRNA及蛋白大量表达,和ATH组相比,小鼠肝损伤明显减轻,而预先给予SnPP则能有效阻抑小鼠肝组织中HSP32 mRNA及蛋白的表述,小鼠急性肝损伤的程度与ATH组相比明显加重。结果提示,HSP32表达增加可以有效缓解热应激所诱导的小鼠急性肝损伤从而对肝脏起到保护作用,HSP32的保护作用可能主要依赖内源性CO,其确切机制和作用途径值得深入探讨。