【摘 要】
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研究背景:在临床上,骨损伤极为常见,是临床多发病与常见病,给患者带来了极大的苦楚。而骨损伤又以骨折为多见,骨折不愈合或延期愈合给患者带来了巨大的压力,并且消耗了大量的人力、物力和财力[1]。随着年龄的增长,随之而来的是不可逆转的骨质疏松,骨量的丢失和骨微结构的改变,骨折的风险也大大的增加。骨折修复的关键因素就是骨折断端的稳定固定和局部血供的良好供应,从而促进受损部位的修复。骨质疏松症可以在任何年龄
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研究背景:在临床上,骨损伤极为常见,是临床多发病与常见病,给患者带来了极大的苦楚。而骨损伤又以骨折为多见,骨折不愈合或延期愈合给患者带来了巨大的压力,并且消耗了大量的人力、物力和财力[1]。随着年龄的增长,随之而来的是不可逆转的骨质疏松,骨量的丢失和骨微结构的改变,骨折的风险也大大的增加。骨折修复的关键因素就是骨折断端的稳定固定和局部血供的良好供应,从而促进受损部位的修复。骨质疏松症可以在任何年龄段发病,但是常见于老年人,尤其是在绝经后的老年女性。骨质疏松症,已经成为了世界性的问题。该病症是继肿瘤和心血管疾病之后,又一个对人类健康造成严重危害的疾病之一。随着我国的老龄人群的不断增加,骨质疏松症的发病率也在不断的增加,严重影响了老龄人的身体健康,给他们的日常生活带来不便,随着老年人骨骼脆性的增加,更加容易引发骨折。骨质疏松性骨折属于一种病理骨折,由于基础疾病的存在,骨骼脆性的增加,通过轻微的外力作用,就可以引发骨折,严重影响老年人的身体健康和生活质量。老年人一旦发生继发性骨折之后,需卧床静养,容易出现各种并发症,肺部感染、褥疮等随之而来,因为局部血供的不足,骨折难愈合,这就有可能导致残疾。因此对于骨质疏松骨折的预防及治疗显得尤为重要。丹酚酸B是唇形科植物丹参的根及根茎提取物,是由1分子咖啡酸和3分子丹参素缩合而成。而丹参具有活血调经、祛瘀止痛、凉血消痈、清心除烦、凉血消痈的功效,常用于治疗胸痹、腹胁疼痛、积烦、热痹、心烦失眠、月经不调、痛经、闭经、肿痛等病症。骨质疏松性骨折的中医辨证论治分为三期,而早期则需要消瘀退肿,使得瘀血祛,新血生,气机畅,化瘀生新。并且也有研究数据表明,丹酚酸B是可以通过激活ERK信号通路来促进人骨髓间充质干细胞(h BMSCs)成骨分化[2]。间充质干细胞因其在体外培养的条件下扩增能力强,广泛的应用于各种不同的组织器官修复工程之中,是十分理想的种子细胞之一[3-5],表型稳定,植入体内后能高质量地修复骨损伤。同时,间充质干细胞具有成骨分化的潜能,还可以作为基因载体,从而使其成为骨组织修复工程中非常有前景的种子细胞来源。成骨分化和成软骨分化是一个密不可分的过程,它们互相影响,共同完成骨折修复[6]。目的:观察中药丹参活性单体之一丹酚酸B对人骨髓间充质干细胞(h BMSCs)成骨分化影响的内在机制,促进血管生成、增强骨髓间充质干细胞的成骨分化能力,以期为使用活血祛瘀法来治疗骨质疏松性骨折提供理论和实验依据。方法:1.将原代人骨髓间充质干细胞在α-MEM完全培养液中进行培养,将传至第3-8代(P3-8)的细胞进行实验,在倒置显微镜下观察细胞生长情况,并拍照留存和记录细胞生长过程;2.收集经药物干预过后的细胞与对照组细胞的总RNA,进行实时荧光定量PCR,以此来筛选出差异性表达的靶点基因以及信号分子;3.对靶点基因进行小干扰RNA(si RNA)干扰技术降低其表达,通过实时荧光定量PCR来检测经si RNA干扰靶点基因之后,该组细胞中ALP、BMP2、OCN等相关成骨相关基因的表达水平;4.细胞免疫荧光检测经丹酚酸B药物干预48小时后成人骨髓间充质干细胞中Endomucin(EMCN)、HIF1-alpha(HIF1A)等蛋白表达情况;5.构建大鼠骨质疏松性骨折模型,骨折局部注射丹酚酸B水溶液,进一步探究丹酚酸B在体内的治疗效果。结果:1.体外培养的人骨髓间充质干细胞增值能力活跃,生长状态良好;2.实时荧光定量PCR的结果显示,长链非编码RNA-MALAT1(lnc RNA-MALAT1)在药物干预组中有差异表达,且呈上升趋势;3.实时荧光定量PCR结果显示,干扰lnc RNA-MALAT1基因表达后可抑制人骨髓间充质干细胞成骨分化;4.细胞免疫荧光显示,丹酚酸B可显著促进EMCN和HIF1A的表达;5.micro CT分析显示,在骨质疏松性骨折大鼠模型中,三维成像、骨密度等均证实药物组可促进骨折的愈合。结论:中药丹参提取物之一丹酚酸B可能通过促进lnc RNA-MALAT1的表达进而改善局部血供,达到加速骨质疏松性骨折的愈合的目的。
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