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第一部分Id1基因对人骨肉瘤细胞MG63恶性逆转向成骨分化的影响目的探讨分析分化抑制因子1(Id1)基因在h MSCs、恶性程度不同的骨肉瘤细胞株143b、MG63、TE85以及人成骨细胞h FOB 1.19中的表达情况,并在MG63细胞中研究Id1基因过表达和沉默对细胞增殖、迁移、侵袭以及细胞周期等恶性表型和成骨分化的影响。方法(1)应用RT-PCR技术检测Id1基因在人h MSCs、恶性程度不同的骨肉瘤细胞株143b、MG63、TE85以及人成骨细胞h FOB 1.19中的表达情况;(2)通过重组腺病毒技术调控骨肉瘤细胞MG63中Id1的表达水平,应用RT-PCR和Western Blot技术分别在m RNA和蛋白水平确定调控效果;(3)分别应用CCK8实验、细胞划痕实验和Transwell实验检测调控MG63细胞中Id1表达水平后细胞增殖能力、迁移能力和侵袭能力等恶性表型的变化;(4)通过流式细胞术检测Id1表达水平调控后MG63细胞周期的变化;(5)应用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)读数法检测调控MG63细胞中Id1表达水平后细胞成骨分化早期指标ALP的活力变化。结果(1)Id1在h MSCs中表达较高,在三种恶性程度不同的骨肉瘤细胞株中的表达量较高且表达量与恶性程度呈现正相关,在成骨细胞中表达最低;(2)Ad Id1重组腺病毒可以使MG63细胞中的Id1表达量增高,Adsi Id1重组腺病毒可以使MG63细胞中的Id1表达量降低(P﹤0.05);(3)Id1过表达后,MG63细胞的增殖能力、迁移能力、侵袭能力等恶性表型均增强,Id1表达量下调后则逆转MG63细胞的恶性表型;(4)Id1过表达后,G1期细胞比例降低,Id1表达量下调后,G1期细胞比例增高(P﹤0.05);(5)Id1表达量下调后,正常成骨分化的早期指标碱性磷酸酶(ALP)表达量增高(P﹤0.05);结论Id1基因在具有多向分化潜能的h MSCs中表达较高,在分化成熟的成骨细胞中表达较低,在三种骨肉瘤细胞中的表达量较高且表达量与恶性程度呈正相关;Id1过表达后MG63细胞的增殖能力、迁移能力和侵袭能力等恶性表型均增强,且处于G1期的细胞比例降低,抑制Id1基因表达可以促使骨肉瘤细胞MG63的增殖能力、迁移能力和侵袭能力等恶性表型均减弱,处于G1期的细胞比例增高,正常成骨分化的早期指标碱性磷酸酶(ALP)表达量增高。第二部分Id1基因对人骨肉瘤细胞MG63恶性逆转向成骨分化的作用机制目的探究分化抑制因子1(Id1)基因对人骨肉瘤细胞MG63恶性逆转向成骨分化的作用机制,为骨肉瘤的基因治疗寻找关键靶点,以期通过分子水平干预实现骨肉瘤的分化治疗。方法(1)通过重组腺病毒技术调控骨肉瘤细胞MG63中Id1的表达水平,应用Western Blot技术在蛋白水平确定调控效果;(2)通过Western Blot技术在蛋白水平检测调控Id1基因的表达后相关蛋白表达的变化。结果(1)Adsi Id1重组腺病毒可以使MG63细胞中的Id1蛋白表达量明显低于RFP处理组和blank组(P﹤0.05);(2)Id1表达量下调后,原癌基因c-myc蛋白表达量明显低于RFP处理组和blank组(P﹤0.05);(3)Id1表达量下调后,侵袭相关的S100A4蛋白和TIMP1蛋白的表达量均明显低于RFP处理组和blank组(P﹤0.05);(4)Id1表达量下调后,细胞周期相关Cyclin D1蛋白和P27蛋白的表达量均明显低于RFP处理组和blank组(P﹤0.05);(5)Id1表达量下调后,抗凋亡相关Survivin和Bcl-2的表达量均明显低于RFP处理组和blank组(P﹤0.05);(6)Id1表达量下调后,内质网应激相关的chop蛋白表达量明显低于RFP处理组和blank组(P﹤0.05),GRP78蛋白表达量明显高于RFP处理组和blank组(P﹤0.05);(7)Id1表达量下调后,ROR2蛋白表达量明显低于RFP处理组和blank组(P﹤0.05)。结论Id1基因表达下调可能通过下调原癌基因c-myc、侵袭相关基因S100A4和TIMP1、周期相关基因Cyclin D1、抗凋亡相关基因Survivin和Bcl-2、内质网应激相关基因chop以及Wnt信号通路相关基因ROR2的表达逆转骨肉瘤的恶性表型并促进其成骨分化。