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分别以东方百合杂种系(O)、亚洲百合杂种系(A)、东方百合×喇叭百合杂种系(OT)为试验材料,研究离体条件下,采用不同授粉方式、胚拯救方式及时间、植物生长调节剂、活性炭对百合杂交组合结实的影响,并采用ISSR分子标记鉴定百合杂交后代的真实性。获得如下主要研究结果:
1.温度对贮藏百合花粉生活力的影响
常温(25℃)条件下贮藏,东方百合杂种系的新鲜花粉生活力最强,且贮藏时间最长为21d。东方百合×喇叭百合杂种系生活力最低,贮藏至7d左右即失去生活力。4℃条件下贮藏花粉,东方百合杂种系的花粉萌发能力时间可达84d左右;而东方百合×喇叭百合杂种系的Manissa花粉贮藏至14d时生活力降为0。
2.离体授粉方法对百合杂交结实的影响
近缘杂交组合采用离体柱头授粉、离体切割花柱授粉、离体子房授粉的子房膨大率和结实率分别为36.67%和16.67%、13.33%和10%、20%和3%;远缘杂交组合3种授粉方法的子房膨大率和结实率分别为22.5%和7.5%、15%和2.5%、17.5%和5%。
3.胚拯救时间和方式对百合杂交结实的影响
授粉后30-40d胚发芽率和成苗率为5%和4%;40-50d为9%和6%;50-60d为14%和9%。采用胚珠培养方式的发芽率和成苗率为3.4%和2.4%,胚培养方式的发芽率和成苗率为4.4%和3%。
4.植物生长调节剂和活性炭对胚拯救效果的影响
添加了6-BA0.5 mg/L、NAA0.1mg/L、NAA0.1mg/L+6-BA0.5 mg/L的培养基胚珠的萌发率和成苗率,分别为8%和4%、12%和6%、18%和14%;胚的萌发率和成苗率分别为10%和4%、16%和10%、24%和18%。对照培养基的胚珠萌发率和成苗率为2%和0,胚萌发率和成苗率为2%和2%。添加了活性炭的培养基胚萌发率为25%,不添加活性炭的培养基胚萌发率为5%。
5.杂交后代的真实性
采用ISSR分子标记对2个组合亲本及其子代进行检测。Tiber×Brunello(O×A)共检测到7个位点;Sorbonne×Robina(O×OT)共检测到8个位点,且父、母本、子代均有共有带。
实验结果表明,在常温和4℃条件下贮藏,东方百合杂种系花粉生活力较强,但品种差异明显;离体柱头授粉对于克服百合受精前障碍效果最好,在授粉后50-60d使用MS+NAA0.1mg/L+6-BA0.5 mg/L+活性炭的培养基进行胚拯救的效果最好;采用ISSR分子标记均能证明杂种的真实性。