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目的:传统中医药在治疗肿瘤时,以阴阳为纲,注重整体观,倡导“扶正祛邪”的治则。相对化疗药而言,中药表现出对肿瘤较弱的直接杀伤能力,但越来越多中药及其活性成分被发现可以调控肿瘤免疫进而抑制肿瘤进展。本课题通过体内和体外实验,以明确中药单体蛇床子素是否对胰腺癌细胞具有直接的抑制作用以及是否可以调控肿瘤微环境而抑制小鼠胰腺原位肿瘤的生长。方法:(1)体外研究蛇床子素对胰腺癌细胞系Panc 02细胞增殖、凋亡和迁移的影响:利用CFSE标记细胞然后通过流式细胞仪检测不同浓度蛇床子素处理48h后Panc 02细胞的增殖指数;利用Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒并通过流式细胞仪检测不同浓度蛇床子素处理48h后Panc 02细胞的凋亡率;通过划痕试验检测不同浓度蛇床子素处理24h、48h后Panc 02细胞划痕的愈合情况;(2)体内研究蛇床子素对小鼠胰腺原位肿瘤进展及肿瘤微环境的影响:建立小鼠胰腺癌原位模型,3天后分别给予蛇床子素(120mg/kg)和对照溶剂(玉米油)腹腔注射,连续治疗14天后,比较对照组与蛇床子素治疗组间的肿瘤大小;分离荷瘤小鼠脾脏细胞和肿瘤浸润单个核细胞,通过流式细胞仪检测对照组和蛇床子素治疗组小鼠脾脏和肿瘤中CD4+T细胞、CD8+T细胞、M1/M2巨噬细胞的比例;(3)蛇床子素调控胰腺癌肿瘤免疫微环境M2巨噬细胞极化的机制研究:分离小鼠骨髓原代细胞,利用M-CSF和IL-4诱导骨髓原代细胞向M2巨噬细胞极化,同时加入20μM、80μM蛇床子素处理24h后通过流式细胞仪检测蛇床子素干预与IL-4单独诱导的M2巨噬细胞的比例;利用Real-time PCR检测蛇床子素干预与IL-4单独诱导骨髓原代细胞向M2巨噬细胞极化过程中M2巨噬细胞特异性分子标记物MRC1,CCL22和TGF-β的相对表达;利用western blotting检测蛇床子素处理2h后IL-4介导的RAW 264.7细胞向M2巨噬细胞极化过程中相关信号通路p-STAT6,p-ERK1/2,C/EBPβ的表达。结果:(1)体外研究发现,经80μM和160μM蛇床子素处理48h后的细胞,增殖指数明显下降;经20μM,80μM蛇床子素分别处理24h,48h后的细胞,划痕愈合能力均明显低于0μM蛇床子素处理后的细胞;与0μM蛇床子素处理48h后的细胞相比,160μM蛇床子素处理的细胞凋亡率明显增加;(2)体内研究发现,蛇床子素治疗后的小鼠胰腺原位肿瘤重量明显低于对照组;与对照组相比,蛇床子素治疗组小鼠的脾脏和肿瘤组织中M2巨噬细胞的比例明显下降;但两组小鼠之间脾脏和肿瘤中的CD4+T细胞、CD8+T细胞、M1巨噬细胞的比例没有变化;(3)机制研究发现,经20μM、80μM蛇床子素处理后,IL-4介导的骨髓原代细胞向M2巨噬细胞极化的比例以及M2巨噬细胞特异性分子标记物MRC1,CCL22和TGF-β的表达明显减少;经20μM、80μM蛇床子素处理后,IL-4介导的RAW 264.7细胞中p-STAT6、p-ERK1/2和C/EBPβ的表达明显下降。结论:蛇床子素可以通过抑制细胞增殖和细胞迁移、促进细胞凋亡发挥对胰腺癌细胞的直接抑制作用;蛇床子素可以通过下调p-STAT6和p-ERK1/2/C/EBPβ信号通路,抑制肿瘤组织中M2巨噬细胞的浸润;综上所述,蛇床子素通过对胰腺癌细胞的直接抑制作用以及对肿瘤微环境中M2巨噬细胞的间接调控作用抑制小鼠胰腺原位肿瘤的进展。