【摘 要】
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目的:提取纯化结核分枝杆菌( MTB )脂阿拉伯甘露聚糖(Lipoarabinomanan,LAM)抗原,并探讨其在肺结核血清学诊断中的应用价值。Q方法:MTB菌体经氯仿甲醇混合液脱脂、超声破碎、
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目的:提取纯化结核分枝杆菌( MTB )脂阿拉伯甘露聚糖(Lipoarabinomanan,LAM)抗原,并探讨其在肺结核血清学诊断中的应用价值。Q方法:MTB菌体经氯仿甲醇混合液脱脂、超声破碎、乙醇回流1h处理后,去除蛋白、脂质、核酸,得到粗制的脂多糖。此脂多糖经Sephacryl-100凝胶过滤层析分离纯化,得到LAM。以该LAM作为包被抗原,建立LAM抗体(LAM-IgG)检测的酶联免疫吸附测定法(即ELISA法)和免疫金渗滤法(DIGFA),并将其用于肺结核和对照血清的LAM抗体检测。结果:从1.89g干重菌体中,获得6mg的LAM,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)后硝酸银染色,在大约37kDa处呈现条带,与对照标准品大小一致。以此LAM作为包被抗原,用ELISA法检测117例肺结核患者(包括涂阳和涂阴),92例非结核肺部疾病患者、188例健康体检者,敏感性71.3%,特异性93.9%;用免疫金渗滤法检测了192例涂阳肺结核患者、46例非结核肺部疾病患者、68例健康体检者血清的LAM抗体,敏感性91.7%,特异性87.8%;结论:成功提取到LAM抗原,此抗原可作为酶联免疫吸附法和免疫金渗滤法的包被抗原,用于肺结核的血清学诊断。
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