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目的: 为深入地研究CLIC1基因在哺乳动物细胞中的生物学功能，我们用酵母双杂交系统筛选出CLIC1结合蛋白β1,4-半乳糖转移酶Ⅱ（β4GalTⅡ），接着我们构建了相关的β4GalT-Ⅱ表达载体（CLIC1相关载体已经构建），随后我们试图用免疫荧光显微技术、GST-pulldown技术以及免疫共沉淀技术证明CLIC1与β4GalTⅡ是否存在相互作用。 方法: 利用PCR方法扩增野生型β4GalTⅡ片段，并将其定向构建到真核酵母载体pGADT7及 pGBKT7，小规模制备酵母感受态细胞，将转化含外源融合基因β4GalTⅡ及CLIC1的酵母重组表达质粒分别共转化进酵母AH109中，转化的酵母细胞铺于SD/-Leu/-Trp/-His/3AT-α-gal盘上进行筛选，通过酵母双杂交技术检测β4GalTⅡ蛋白是否是CLIC1蛋白的结合蛋白。接着分别设计带FLAG标签和GFP标签的β4GalTⅡ基因的特异性引物，以含人类β4GalTⅡ基因全长的cDNA文库片段为模板，定向构建到pcDNA3.1(+)及pCDGFP真核表达载体，构建真核表达质粒pcDNA3.1-β4GalTⅡ-FLAG和pCDGFP-β4GalTⅡ。通过酶切和测序鉴定阳性重组载体后，利用脂质体法分别单独转染不同标签的β4GalTⅡ及CLIC1质粒进COS7细胞，免疫荧光显微镜观察其在细胞内的定位情况。之后将pcDNA3.1-β4GalTⅡ-FLAG和pCDGFP-CLIC1，pCDGFP-β4GalTⅡ和pcDNA3.1-CLIC1–FLAG互换标签共转进COS7细胞，研究各组蛋白在哺乳动物细胞内的共定位情况。接着将GST和GST-CLIC1转化进BL21感受态，制备相关融合蛋白，分别将两种不同标签的β4GalTⅡ质粒瞬时转染进HEK293T细胞，通过GST Pull-down技术检测CLIC1蛋白与β4GalTⅡ蛋白在体外是否存在相互作用。最后，将pcDNA3.1-β4GalTⅡ-FLAG和pCDGFP-CLIC1，pCDGFP-β4GalTⅡ和pcDNA3.1-CLIC1–FLAG互换标签瞬时转染进HEK293T细胞，利用免疫共沉淀技术检测CLIC1蛋白与β4GalTⅡ蛋白在哺乳动物体内是否存在相互作用。 结果: 酶切及测序结果证实pcDNA3.1-β4GalTⅡ-FLAG、pCDGFP-β4GalTⅡ、pGADT7-β4GalTⅡ及pGBKT7-β4GalTⅡ重组表达质粒构建成功。酵母双杂交实验表明：真核酵母细胞内即时共表达的β4GalTⅡ蛋白和CLIC1蛋白具有部分α-半乳糖苷酶活性，提示二者可能存在一定的相互作用。免疫荧光实验观察发现：pcDNA3.1-β4GalTⅡ-FLAG及pCDGFP-β4GalTⅡ蛋白在二者在COS7细胞中均主要定位在细胞核周围，并有明显的块状染色，胞核中未见明显分布。CLIC1蛋白在细胞中主要分布于细胞核和细胞核膜，也有部分分布于细胞质中。两种蛋白的定位均未因标签改变而发生明显变化。共定位实验显示CLIC1蛋白与β4GalTⅡ蛋白没有明显的共定位。后续的GST pull-down实验证实CLIC1蛋白在体外条件下不能下拉β4GalTⅡ蛋白，免疫共沉淀实验也进一步表明，在HEK293T细胞中，CLIC1蛋白不能把β4GalTⅡ蛋白共沉淀下来。 结论: 酵母双杂交实验所体现出的CLIC1蛋白和β4GalTⅡ蛋白之间可能的相互作用是假阳性状态。间接免疫荧光实验、GST pull-down实验及免疫共沉淀实验共同验证了CLIC1蛋白和β4GalTⅡ蛋白在体内外均不存在明显的相互作用。