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目的:Ghrelin是一种能够刺激食欲的胃肠道肽,以酰化(Acylated ghrelin,AG)和未酰化(Unacylated ghrelin,UAG)两种形式存在。AG可以与生长激素促分泌素受体结合,诱导脂肪聚集并降低胰岛素敏感性,UAG可以作为一种单独的激素拮抗AG的作用,但其结合的受体尚未明确。因此,关于UAG的活性研究较少,且主要集中在摄食调控的研究。本课题研究了UAG对糖脂代谢的调控作用及其可能的作用机制,并通过外周和中枢给予UAG,观察其对非酒精性脂肪肝病(Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)的干预作用,并初步探讨其可能机制。方法:采用免疫荧光染色观察中枢核团下丘脑外侧区(Lateral hypothalamic area,LHA)和外周给予UAG对orexin-A免疫阳性神经元中c-fos表达的影响,并通过神经元放电记录检测中枢UAG对葡萄糖敏感神经元(Glucose-sensitive neuron,GS neurons)放电的影响。外周及中枢LHA给予UAG后,采用酶联免疫吸附测定(Enzyme-linked immuno sorbent assay,Elisa)测定大鼠血清中葡萄糖、胰岛素、总胆固醇(Total cholesterol,TC)、甘油三酯(Triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(Low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(High density lipoprotein cholesterol,HDL-C)的含量;使用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测大鼠肝脏中肉碱棕榈酰转移酶-1(Carnitine palmitoyltransferase-1,CPT-1)和乙酰辅酶A羧化酶-1(Acetyl-CoA carboxylase-1,ACC-1)的mRNA表达;预先给予抗orxin-A抗体,观察其对LHA给予UAG调控糖脂代谢的影响。采用高糖高脂高胆固醇饲料喂养大鼠构建NAFLD病理模型后,外周及中枢给予UAG进行干预,采用Elisa测定大鼠血脂生化指标、丙氨酸转氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(Aspartate aminotransferase,AST)和胰岛素抵抗指数(Homeostatic model assessment of insulin resistance,HOMA-IR)的变化;使用RT-PCR检测大鼠肝脂酶的mRNA表达;采用比色法测定大鼠肝脏TG的含量;通过苏木精-伊红染色法(Hematoxylin-eosin staining,HE staining)观察大鼠肝组织结构病理变化;使用蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)测定大鼠肝脏及下丘脑部位胰岛素信号通路因子磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphoinositide 3-kinase,PI3K)、磷酸化的磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphorylated PI3K,p-PI3K)、蛋白激酶B(Protein kinase B,PKB/Akt)、磷酸化的蛋白激酶B(Phosphorylated Akt,p-Akt)、雷帕霉素(Mammalian target of rapamycin,m TOR)和磷酸化的雷帕霉素(Phosphorylated mTOR,p-mTOR)的蛋白质表达。结果:与对照组相比,LHA给予UAG激活LHA中的orexin-A免疫阳性神经元,并刺激LHA中葡萄糖抑制神经元(Glucose-inhibited neurons,GI)放电,后者被预先给药抗orexn-A抗体部分阻断;而外周给予UAG并没有激活LHA中的orexin-A免疫阳性神经元。与对照组相比,外周及LHA给予UAG显著降低了大鼠血清中葡萄糖、胰岛素、TC、TG、LDL-C水平(p<0.05-0.01),而显著升高了血清HDL-C水平(p<0.05-0.01);增强肝脏CPT-1的mRNA表达(p<0.05-0.01),而减弱ACC-1的mRNA表达(p<0.05-0.01);预先给予抗orexin-A抗体可以部分阻断LHA给予UAG引起的一系列生理变化(p<0.05)。与对照组相比,NAFLD模型组大鼠血脂、转氨酶和HOMA-IR水平明显升高(p<0.01),肝脏TG水平显著升高(p<0.01),且肝脏CPT-1的mRNA表达减少(p<0.05-0.01),而ACC-1的mRNA表达增多(p<0.05-0.01),肝组织结构紊乱,肝细胞有明显的脂肪变性,表明NAFLD病理模型的成功构建。与NAFLD模型组相比,外周和中枢给予UAG后,大鼠血清中TC、TG、LDL-C、ALT、AST和HOMA-IR水平明显下降(p<0.01),而血清HDL-C水平明显上升(p<0.05);肝脏TG水平显著下降(p<0.01),且肝脏CPT-1 mRNA表达增强(p<0.01),而ACC-1 mRNA表达减弱(p<0.01);肝组织结构损害明显恢复。与NAFLD模型组相比,外周和中枢给药组大鼠,其肝脏和下丘脑的p-PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白表达分别增强(p<0.01)。结论:外周和LHA给予UAG参与正常大鼠的糖脂代谢调控,LHA中UAG的作用可能与其激活orexin-A免疫阳性神经元有关,但外周UAG的作用机制更为复杂,需进一步探讨。外周和中枢给予UAG对饮食诱导的NAFLD均有一定的干预作用,该作用可能与其分别刺激肝脏和下丘脑胰岛素信号通路因子磷酸化,恢复通路活性有关。本课题为完善UAG参与糖脂代谢调控的机制和发现UAG作为NAFLD的潜在治疗靶点提供了实验和理论依据。