【摘 要】
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近年来,酒精在世界各地的消费巨大,酒精相关的肝病对人们的生命造成了很大的威胁。目前治疗酒精性肝病最基本的途径是戒酒,然后再根据肝病发展的阶段对症给药。本研究选取药食同源的中药菊花作为研究对象,比较了 7种菊花的化学成分与抗氧化活性;研究亳菊水提物及其对酒精诱导的肝损伤小鼠及损伤HepG2肝细胞的保护作用,同时探讨亳菊水提物对酒精诱导的氧化应激的保护机制。主要研究内容和结果如下:1.菊花的含量测定及
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近年来,酒精在世界各地的消费巨大,酒精相关的肝病对人们的生命造成了很大的威胁。目前治疗酒精性肝病最基本的途径是戒酒,然后再根据肝病发展的阶段对症给药。本研究选取药食同源的中药菊花作为研究对象,比较了 7种菊花的化学成分与抗氧化活性;研究亳菊水提物及其对酒精诱导的肝损伤小鼠及损伤HepG2肝细胞的保护作用,同时探讨亳菊水提物对酒精诱导的氧化应激的保护机制。主要研究内容和结果如下:1.菊花的含量测定及其抗氧化和细胞保护活性研究。应用回流提取法制备7种菊花的水提取物,采用福林酚法和NaOH比色法测定7种菊花的总酚和总黄酮含量,其范围分别在 169.58±0.02～447.14±0.09 mg/g 和 148.82±0.06～812.25±0.06 mg/g之间;HPLC对芹菜素-7-O-葡萄糖苷、木犀草素、绿原酸、3,5-O-二咖啡酰奎宁酸和木犀草苷的含量进行测定,发现2种酚酸类化合物绿原酸和3,5-O-二咖啡酰奎宁酸在亳菊中的含量最高,分别为57.8240和132.8316 mg/g。比较了 7种菊花在体外清除自由基的活性,结果表明它们在一定的浓度范围内具有浓度依赖效应。其中亳菊具有较好的抗氧化活性,它们的DPPH自由基清除能力依次为太阳菊＜怀菊＜贡菊＜杭菊＜祁菊＜滁菊＜亳菊,ABTS自由基清除能力及铁离子还原能力依次为太阳菊＜怀菊＜贡菊＜杭菊＜滁菊＜祁菊＜亳菊。以200 mM的乙醇作用于HepG2细胞,建立酒精诱导的肝细胞损伤模型,采用MTT法筛选菊花与酒精共同作用的有效浓度为0.2 mg/ml,然后比较不同菊花对酒精诱导的ALT、AST以及TG含量的影响,发现亳菊具有更强的生物活性,显著降低酒精诱导的损伤细胞ALT（p＜0.001）、AST（p＜0.01）和TG（p＜0.001）水平。2.亳菊水提物对酒精性肝损伤小鼠的保护作用。建立酒精诱导的小鼠肝损伤模型,分别用低（150 mg/（kg.d））、中（350 mg/（kg·d））和高剂量组（550 mg/（kg.d））的亳菊水提物作用9周,同时以水飞蓟素（150 mg/（kg·d））作为阳性对照,研究其对肝功能、肝脂以及抗氧化水平的影响。结果表明,亳菊和水飞蓟素能显著降低小鼠血清中ALT和AST的水平,降低肝组织中TG和TC的含量,HE染色和油红O染色结果显示,亳菊和水飞蓟素能够改善酒精诱导的肝组织形态结构的损伤及脂质积累。此外,亳菊和水飞蓟素能增加小鼠肝脏中抗氧化剂CAT、GSH和SOD的含量,同时降低脂质过氧化最终产物（MDA）的水平,而且,亳菊水提物诱导抗氧化相关蛋白Nrf2和NQO1的表达,保护酒精诱导的肝组织氧化应激损伤。3.绿原酸、木犀草素、3,5-O-二咖啡酰奎宁酸对酒精性肝损伤细胞的保护作用。建立酒精诱导的HepG2肝细胞损伤模型,比较亳菊中含量较高的3种活性成分对ALT、AST的影响,结果显示它们不同程度地降低了 ALT和AST的水平。进一步分析亳菊及其主要成分对ROS以及Nrf2蛋白的表达的影响,结果表明亳菊及其主要成分通过诱导抗氧化蛋白Nrf2的表达（p＜0.01）,降低ROS的生成,改善小鼠肝脏氧化应激,发挥对酒精性肝病的保护作用。综上,亳菊水提物通过诱导Nrf2通路发挥抗氧化作用,抑制肝脏的氧化应激,进而改善酒精诱导的小鼠肝损伤,可作为治疗酒精性肝病的天然药物进行开发研究。
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