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目的:本研究通过观察Hedgehog信号通路相关分子在单侧输尿管结扎大鼠肾组织以及转化生长因子β 1诱导体外培养的HK-2细胞中的表达变化,探讨加味肾康方抗肾纤维化的作用及其机制,以期为中医药防治肾纤维化提供新的思路。方法:实验一:加味肾康方对UUO模型大鼠肾纤维化及HH信号通路表达的影响将126只SPF级雄性SD大鼠随机分为7组:正常组、假手术组、UUO模型组、西药组、中药低/中/高浓度组。正常组不予处理,假手术组切开皮肤后仅游离左侧输尿管随即缝合,其余各组进行左侧输尿管结扎手术。从术后第三天开始灌胃,中药低/中/高浓度组分别给予低/中/高浓度加味肾康方中药液,西药组给予盐酸贝那普利,正常组、假手术组和UUO模型组分别给予等量生理盐水。7组大鼠分别于灌胃后7/14/21天在10%水合氯醛的麻醉下行腹主动脉采血用于血肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)检测,并取左侧肾脏组织,制作病理切片。行HE染色观察肾组织病理变化,Masson染色观察肾纤维化的程度,免疫组化检测α-SMA及HH信号通路相关分子Shh、Ptch1、Smo、Gli1的表达情况,采用SPSS24.0数据统计软件进行统计学分析。实验二:加味肾康方含药血清对HK-2细胞的影响选取SPF级雄性SD大鼠制备加味肾康方含药血清和空白血清。培养HK-2细胞,随机分为4组:对照组、TGF-β1诱导模型组、单纯含药血清组、中药治疗组。各组细胞干预48小时后行RT-PCR检测Vimentin、E-Cad、Shh、Gli1的mRNA表达量,采用SPSS24.0数据统计软件进行统计学分析。结果:实验一:(1)生化检测:在7天阶段,与假手术组相比,UUO模型组的尿素氮水平升高(P<0.05);与UUO模型组相比,西药组以及中药低/中/高浓度组的尿素氮均有所降低(P<0.05)。在14天阶段,各组大鼠尿素氮水平差异无统计学意义(P>0.05)。在21天阶段,与正常组和假手术组比,UUO模型组的尿素氮水平升高(P<0.05)。在7天阶段、14天阶段,各组大鼠肌酐水平差异无统计学意义(P>0.05)。在21天阶段,与正常组和假手术组比,UUO模型组的尿素氮水平升高(P<0.05);与UUO模型组相比,西药组肌酐水平降低(P<0.05)。(2)HE染色和Masson染色:正常组和假手术组无明显病理改变,其余各组均可见不同程度的炎性细胞浸润、肾小管上皮细胞和肾间质的损伤、肾小管扩张,间质面积增大,间质胶原纤维沉积。其中UUO模型组纤维化病变程度较重。(3)免疫组化检测:α-SMA的表达:在7天阶段,各组大鼠α-SMA表达差异无统计学意义(P>0.05)。在14天阶段、21天阶段,UUO模型组的表达水平最高,与UUO模型组比较,西药组以及中药低/中/高浓度组的表达水平均显著降低(P<0.05)。Shh的表达:UUO模型组的表达最高,与UUO模型组比较,西药组以及中药低/中/高浓度组的表达均有所降低(P<0.05)。Ptch1的表达:UUO模型组表达最低,与UUO模型组比,西药组以及中药低/中/高浓度组的表达均有所升高(P<0.05)。Smo的表达:UUO模型组的表达最高,西药组以及中药低/中/高浓度组的表达比UUO模型组比较均有所降低(P<0.05)。Gli1的表达:UUO模型组表达最高,西药组以及中药低/中/高浓度组的表达比UUO模型组均有所降低(P<0.05)。实验二:(1)E-Cad的表达变化:与对照组比,TGF-β 1诱导模型组E-Cad mRNA表达量显著下降;与TGF-β 1诱导模型组相比,中药治疗组E-CadmRNA表达量明显上升(P<0.05)。(2)Vimentin的表达变化:与对照组比,TGF-β1诱导模型组Vimentin mRNA表达量显著升高;与TGF-β 1诱导模型组相比,单纯中药治疗组VimentinmRNA表达量明显下降(P<0.05)。(3)Shh的表达变化:与对照组相比,TGF-β 1诱导模型组Shh mRNA表达量显著上升;与TGF-β1诱导模型组比,中药治疗组ShhmRNA表达量明显下降(P<0.05)。(4)Gli1的表达变化:与对照组相比,TGF-β 1诱导模型组Gli1 mRNA表达量升高;与TGF-β 1诱导模型组比,中药治疗组的表达量有所下降(P<0.05)。结论:(1)加味肾康方能够改善肾纤维化大鼠炎性细胞浸润及肾小管上皮细胞和肾间质的损伤,减轻胶原纤维沉积,上调E-Cad的表达,下调α-SMA和Vimentin的表达,对肾纤维化具有一定的治疗作用。(2)UUO模型大鼠肾组织中Shh、Smo、Gli1的表达显著升高,而Ptch1的表达下降,提示HH信号通路的激活可能参与肾纤维化的发生发展。(3)加味肾康方可以下调HH信号通路的相关分子Shh、Smo、Gli1的表达水平,同时上调Ptch1的表达,从而达到抗纤维化作用,提示加味肾康方治疗肾纤维化的作用机制可能与抑制HH信号通路活性有关。