[背景和目的]肿瘤的发病率正在不断地上升,已成为严重危害人类健康的常见疾病。据世界卫生组织报道,全球在2020年癌症的发病人数将达1500万。我国卫生部最近公布的资料显示,无论是在城市或农村,癌症的发病率已超过了心血管疾病,上升到第一位。目前,治疗肿瘤的方法很多,在肿瘤的综合治疗中,药物治疗仍占有重要地位。现在全身化疗不论是单药还是联合化疗,多采用传统的化疗药物,癌症对大多数常规化疗药物反应不佳,毒副作用较大,在杀伤肿瘤细胞的同时,正常细胞也受到很大损害,而且肿瘤细胞对化疗药物易产生耐药性,使其在临床上的应用受到很多限制。因此,寻找高效、低毒副作用的新型抗癌药物成为目前医学领域研究的重要课题之一IHA-01(保密代称)是从云南民间用以治疗肿瘤的2500多种产于云南的植物、动物、矿物药进行了体外瘤株及动物体内的抗肿瘤药物的筛选研究,发现的中草药提取物。其能否具有抑制人癌细胞增殖、诱导凋亡作用,国内外未见文献报道。因此,本研究通过体外抗肿瘤实验及其对DNATopo酶活性的影响实验研究,从细胞和分子水平上观察IHA-01对人肺癌细胞抑制增殖、诱导凋亡以及对抗肿瘤活性靶点DNA拓扑异构酶活力的抑制作用,探讨其可能的作用机制,为IHA-01抗肿瘤作用的研究奠定一定的理论和实验依据。[方法]1、体外培养GLC细胞,改MTT法进行IHA-01有效作用浓度筛选,观察IHA-01对肺癌GLC增殖的影响,并确定其工作浓度(1/2IC50)。2、应用透射电镜观察细胞超微结构；流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡；探讨IHA-01抑制GLC细胞增殖和诱导其凋亡的作用。3、Topo酶介导的负超螺旋]pBR322 DNA解旋实验反应检测IHA-01对Topo酶活力的影响；探讨IHA-01的抗肿瘤机制,特别是对DNA拓扑异构酶(DNAtopoisomerases)活性的影响。[结果]第一部分结果：1、不同浓度IHA-01作用不同时间对GLC细胞增殖的抑制作用结果显示：0.01、0.1、1、10、100 ug/ml的IHA-01作用24、48、72 h后,对GLC细胞增殖均有不同程度的抑制作用,GLC细胞增殖呈时-效和量-效依赖关系。2、IHA-01作用GLC细胞48h的半数抑制浓度IC50为1.33ug/ml。以IHA-01作用于GLC细胞48h后IC50的1/2,即0.7ug/ml作为后续实验中IHA-01的工作浓度。3、IHA-01对GLC细胞作用的透射电镜超微结构观察显示：对照组24h培养后GLC细胞生长良好,细胞表面微绒毛样突起较多,细胞核大而不规则,核分裂像常见,细胞分化较低,细胞器少、幼稚,细胞核质比较大,为恶性肿瘤细胞的形态特征。IHA-01作用GLC细胞24h后：部分细胞出现细胞连接消失,微绒毛消失,胞质密度增加,细胞器增多,核染色质浓缩成2个或几个大的团块边聚于核被膜下,可见药物有诱导细胞早期凋亡的作用。4、IHA-01对GLC细胞周期作用的流式细胞结果显示：对照组G0/G1期细胞比例为28.15%,S期细胞比例31.05%,而G2/M期细胞比例为41.01%。IHA-01组细胞周期发生明显的G0/G1期阻抑,G0/G1期细胞比例上升为39.79%,而S期细胞则下降为22.55%；G2//M期细胞比例则下降到37.64%,细胞周期被阻滞于G0/G1期；部分细胞出现凋亡,可见亚二倍体峰。第二部分结果：1、IHA-01对DNATopoⅠ影响实验显示,加入为不同浓度的IHA-01进行琼脂糖电泳后,随着IHA-01浓度的增加,超螺旋DNA均无明显变化；说明IHA-01对TopoⅠ的活性没有影响；阳性对照药羟喜树碱在75ug/ml浓度时能显著抑制TopoⅠ酶的活性。而IHA-01对DNATopoⅡ抑制实验结果显示,随着IHA-01浓度的增加,被TopoⅡ解旋成松弛型DNA减少,超螺旋型DNA增多。表明IHA-01具有一定的抑制Topo酶Ⅱ的的作用,10μg/ml剂量组对Topo酶Ⅱ有较好的抑制作用,抑制该酶介导的DNA断裂反应,2ug/ml剂量组作用稍差,剂量降至0.4ug/ml抑制作用不明显,剂量效应关系密切。2、根据实验结果我们推测IHA-01的直接作用靶点是DNA拓扑异构酶Ⅱ,该药为拓扑异构酶Ⅱ抑制剂,且IHA-01对DNA有直接断裂作用。[结论]1、不同浓度IHA-01作用不同时间对GLC细胞增殖具有明显的抑制作用,呈时-效和量-效依赖关系。2、IHA-01能够使GLC细胞存活数量减少,发生G0/G1期阻滞,S期细胞数量显著减少,具有抑制GLC细胞增殖作用。3、IHA-01能够改变GLC细胞的超微结构,出现典型的凋亡形态学变化,具有诱导GLC细胞凋亡的作用。4、结合IHA-01体外抗肿瘤活性和对DNATopo抑制作用的实验结果,推测DNA TopoⅡ是IHA-01的作用靶点之一,且IHA-01对DNA有直接断裂作用。