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背景:急性心梗是目前世界范围内导致人类死亡的最常见病因之一,尽管由于目前药物溶栓治疗及冠脉介入治疗等方式的普及,大大的减少了急性心肌梗死患者的死亡率,然而心梗后心肌细胞凋亡的持续发生仍然是导致心梗患者心功能恶化,心脏重塑持续进展的重要原因,因此有效的抑制心梗后心肌细胞的凋亡对于抑制心脏重塑,改善患者的心功能及生活质量具有重要的临床意义。目的:研究circular RNA-Ttc3在心梗后心肌凋亡及心肌重塑中的作用。方法:1.确定circular RNA-Ttc3碱基序列及接头位置:(1)对核酸电泳结果行DNA一代测序,将测序结果与NCBI上TTC3基因信息进行比对,确定circular RNA-Ttc3碱基序列及接头位置.(2)通过RNA-R酶消化法及核酸电泳进一步确定circular RNA-Ttc3环状结构;2.明确circular RNA-Ttc3在心梗模型及缺氧心肌模型中的表达情况:(1)通过结扎大鼠左侧冠状动脉前降支近端,建立大鼠心梗模型,5周后通过实时定量PCR比较心梗缺血区circular RNA-Ttc3的表达;(2)原代心肌细胞分别缺氧处理0,6,12,24,36小时,进一步通过实时定量PCR检测circular RNA-Ttc在缺氧模型中的表达情况。3.研究circular RNA-Ttc3在心肌缺氧性凋亡及心梗中的作用:(1)通过构建circular RNA-Ttc3的过表达质粒及小干扰RNA,观察circular RNA-Ttc3对心肌细胞凋亡及ATP合成的影响。(2)根据实验要求将健康雄性大鼠,分为假手术组,心梗组,心梗+circular RNATtc3干扰组,心梗+腺相关病毒对照组,通过二维心脏超声,组织masson染色,组织Western Blot,TUNEL等方法,明确circular RNA-Ttc3心梗后心肌凋亡及心脏重塑的影响。4.明确circular RNA-Ttc3心脏保护作用的下游mi RNA:(1)利用生物信息学软件Reg2.0,RNAfold等,预测circular RNA-Ttc3靶向吸附的mi RNA(Micro RNA)(2)荧光素酶实验,原位杂交,RIP等技术,确定circular RNA-Ttc3靶向吸附的mi R-15b。(3)合成mi R-15b的mimics及inhibitors,将circular RNA-Ttc3过表达质粒与circular RNA-Ttc3小干扰共转,通过Western Blot,TUNEL检测及ATP检测等手段,确定circular RNA-Ttc3通过吸附mi R-15b介导其心肌保护作用。5.明确circular RNA-Ttc3-mi R-15b下游的靶基因:(1)利用Target Scan,mi RDB及mi RTar Base数据库及荧光素酶实验,确定mi R-15b下游的靶基因;(2)通过改变circular RNA-Ttc3的表达丰度,观察靶基因表达情况;(3)设计靶基因si RNA,将其与circular RNA-Ttc3共转入心肌细胞,通过Western Blot,TUNEL检测及ATP检测等技术手段,确定该靶基因是否为circular RNA-Ttc3心肌保护作用的下游效应分子。结果:1.circular RNA-Ttc3通过线性RNA-Ttc3的外显子2-5反向剪切拼接而成。2.circular RNA-Ttc3在心梗模型及心肌缺氧模型中明显升高。3.circular RNA-Ttc3表达上调可以减弱缺氧对心肌细胞损伤;反之,circular RNA-Ttc3表达下调可以加剧心梗后心肌细胞的凋亡及心脏的重塑过程。4.circular RNA-Ttc3通过靶向吸附mi R-15b,介导其心脏保护功能。5.circular RNA-Ttc3通过解除mi R-15b对Arl2的表达调控,进而介导其心肌保护功能。结论:心梗后心脏组织中circular RNA-Ttc3表达上调,通过靶向吸附mi R-15b,解除其对靶基因Arl2的表达调控,进而抑制心梗后心肌细胞的凋亡及心脏重塑。