利用SPION标记和AAP识别探究BMSC在CKI中的肾定位和存活性

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足细胞的损伤和丢失是慢性肾小球疾病和进展的重要因素。近年来,采用干细胞来治疗足细胞损伤已取得一定进展。为了深入考察输注到小鼠体内干细胞的分布及聚集情况以及干细胞在肾病修复中所担任的角色及最终命运,必须对外源移植的干细胞进行长时间的追踪。然而,当前的活细胞显影技术在灵敏度和干细胞存活表征方面存在缺陷,不能满足再生医学研究的需求。本实验利用前期筛选出的特异性结合小鼠BMSCs的核酸适配体构建了激活式核酸适配体荧光探针(AAP),将其与基于SPION的MRI成像技术耦合,构建出结合MRI的高空间分辨率和荧光成像的灵敏性和存活性表征两方面优势的双模态示踪技术(SPION-AAP)。阿霉素肾病模型是用来模拟临床上肾病综合征的一种局灶节段性肾小球硬化疾病的模型,利用该模型可以很好地研究慢性蛋白尿肾病(CKI)的发展过程。基于此,本论文拟构建阿霉素肾病模型,并通过MRI和荧光成像双模态示踪技术来研究输注的BMSCs在阿霉素肾病模型中的肾定位及存活性。主要包括以下三个方面的工作:1、通过多次尾静脉注射阿霉素的方式构建出Balb/c小鼠的阿霉素肾病模型,并通过对其蛋白尿水平进行检测及肾脏病理切片的观察,评估了阿霉素肾病模型的成功与否。2、通过Fe3O4@CA-PLL与Fe3O4标记BMSCs后的普鲁士蓝染色、单细胞铁含量、以及细胞活力分析,比较两者对BMSCs的标记效率;通过对筛选的核酸适配体(Apt)与小鼠的靶细胞BMSCs及其他相关细胞进行流式检测分析及激光共聚焦显微镜的方法验证了此条核酸适配体对细胞的识别能力及特异性。3、通过将基于Fe3O4@CA-PLL的核磁共振成像技术与基于激活式荧光核酸适配体探针的荧光成像技术相耦合,研究BMSCs向目标肾缺损部位的迁移、定位及存活情况;并通过静态组织学分析的方法,进一步验证目标肾缺损部位BMSCs的定位及存活情况。
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