鲤春病毒血症（Spring Viraemia of Carp,SVC）是一种传染性与致死率均较高的鱼类传染病,引起该病的病原是鲤春病毒血症病毒（Spring Viraemia of Carp virus,SVCV）。SVCV属于弹状病毒科（Rhabdoviridae）水泡病毒属（Vesiculovirus）的一种,为有囊膜的单股负链RNA病毒,其主要宿主为鲤科鱼类,其中鲤鱼最易感染并致死,目前尚无有效的治疗药物与方法。至今,有关SVCV的诊断方法的研究资料较多,但对其侵染机制的研究较少,尚不清楚SVCV赖以进入宿主细胞的受体。鉴定SVCV的受体,有助于了解该病毒感染机理,并可为研究疫苗及治疗方法提供理论基础。本研究以鲤鱼上皮瘤细胞（Epithelioma papulosum cyprini,EPC）作为宿主细胞对SVCV进行扩培,使用蔗糖密度梯度离心法分离纯化该病毒粒子,离心后病毒粒子主要分布在30%及45%的蔗糖层之间。通过三功能交联分子Sulfo-SBED和ASB分别标记纯化的病毒粒子,然后与EPC膜蛋白或EPC活细胞孵育以捕获SVCV结合蛋白,通过链霉亲和素层析柱进行亲和层析纯化捕获蛋白后进行质谱鉴定。经质谱分析,再使用本研究经转录组测序获得的蛋白质数据库进行搜索比对鉴定,结果发现使用Sulfo-SBED捕获结合蛋白共578种,对照组共159种;使用ASB捕获到的蛋白共415种,对照组共287种。对比找出实验组捕获到而对照组未捕获到的蛋白,采用在线跨膜区分析工具（Trans Membrane prediction using Hidden Markov Models,TMHMM）对其逐一进行跨膜区分析预测,Sulfo-SBED捕获到29种膜蛋白,ASB捕获到21种膜蛋白,其中6种蛋白两种方法均有捕获。分别将这些膜蛋白的序列在NCBI上进行blast分析,发现其中有8种蛋白分别与细胞膜蛋白高度同源,其余36种与定位在线粒体或核糖体等细胞器膜上的蛋白高度同源,推测这8种蛋白极有可能存在SVCV受体,分别为EPC转录组测序编号Unigene12835、Unigene13423、Unigene19308、Unigene7122、CL1989.Contig1、CL3290.Contig2、CL3871.Contig1和CL51.Contig3。接下来采用RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术对该8种蛋白进行功能验证及受体初步鉴定。使用RNaseⅢ体外消化双链RNA（Double-stranded RNA,ds RNA）法制备小干扰RNA（small interference RNA,siRNA）,将RNaseⅢ酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳,通过切胶回收纯化获得siRNA混合物（siRNA mixture,siRNA mix）,然后将siRNA mix转染至EPC细胞,24h后收样,通过荧光定量PCR技术检测靶基因的相对表达量。结果显示,siRNAmix在转染体系中终浓度为0.1nmol/L及0.5 nmol/L时,靶基因均有较好的下调效果,与Mock组相比,基因相对表达量可以下调50%左右（P<0.05）。对8个拟鉴定基因的siRNA mix进行两两组合,共28个组合。将组合中两个基因的siRNA mix混匀转染至EPC中,每个基因的siRNA mix的终浓度均为0.5 nmol/L。转染48 h,加入等量的SVCV病毒原液攻毒。攻毒36 h后,收集样品,利用荧光定量PCR技术检测病毒的增殖情况。结果显示,只有CL3290.Contig2和CL51.Contig2混合的组合的病毒拷贝数显著低于Mock组,说明CL3290.Contig2与CL51.Contig2可能为SVCV的受体或者共受体。分别单独使用终浓度0.5 nmol/L的siRNA mix转染EPC靶向干扰CL3290.Contig2和CL51.Contig2然后攻毒检测,发现分别单独抑制这两个基因的表达均可以在一定程度上减轻SVCV的感染,进一步证明了这两个基因极有可能是SVCV侵染EPC细胞的受体。